[理学]分析化学色谱部分PPT6.ppt

键合相色谱法 * 此法的最大缺点是不能用于酸、碱度过大或存在氧化剂的缓冲溶液作流动相的体系。如何根据样品极性种类来选择化学键合的固定相，请参看下表。 * 离子交换色谱法 * 此法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离的物质，通常都可用离子交换色谱法进行分离。它不仅适用无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。因此，应用范围较广。 离子交换色谱法—原理 * 离子交换色谱 离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的。其固定相采用离子交换树脂，树脂上分布有固定的带电荷基团和可游离的平衡离子。当待分析物质电离后产生的离子可与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换，其交换反应通式如下： 离子交换色谱法—原理 * 阳离子交换： 阴离子交换： 离子交换色谱法—原理 * 式中[A]r，[B]r 分别代表树脂相中洗脱剂离子（A）和试样离子（B）的浓度，[A]、[B]则代表它们在溶液中的浓度。平衡常数KB/A表示试样离子B与固定相树脂间亲和力的大小：KB/A越大，说明B离子与固定相亲和力越强，越易保留而难于洗脱。一般说来，B离子电荷越大，水合离子半径越小，KB/A值就越大。 达平衡时 体积排阻色谱法 * 体积排阻色谱法又称凝胶色谱法，主要用于较大分子的分离。与其他液相色谱方法原理不同，它不具有吸附、分配和离子交换作用机理，而是基于试样分子的尺寸和形状不同来实现分离的。 排阻色谱 体积排阻色谱法 * 体积排阻色谱被广泛应用于大分子的分离，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。它具有其他液相色谱所没有的特点：（1）保留时间是分子尺寸的函数，有可能提供分子结构的某些信息。(2)保留时间短，谱峰窄，易检测，可采用灵敏度较低的检测器（3）固定相与分子间作用力极弱，趋于零。由于柱子不能很强保留分子，因此柱寿命长。（4）不能分辨分子大小相近的化合物，相对分子质量差别必须大于10％才能得以分离。 体积排阻色谱法—分离原理 * 体积排阻色谱是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法。其固定相为化学情性多孔物质——凝胶，它类似于分子筛，但孔径比分子筛大。凝胶内具有一定大小的孔穴，体积大的分子不能渗透到孔穴中去而被排阻，较早地被淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本上按其分子大小，排阻先后由柱中流出。 M.W. tR * M.W. tR * M.W. tR * M.W. tR * M.W. tR * * 第20章 高效液相色谱法 王永钊 catalyst@sxu.edu.cn 化学化工学院B304 * * 主要内容: 2、理解掌握各类液相色谱的分离原理、固定相和 流动相 1、掌握高效液相色谱的分类 高效液相色谱的分类 * 根据固定相和流动相的相对极性差别： 正相色谱—— 以强极性的水、三乙二醇等涂渍在硅胶或氧化铝上为固定相，以相对非极性的正己烷、异丙醚为流动相。 反相色谱——通常以非极性的烃类为固定相，以相对极性的水、甲醇、乙腈等为流动相。 高效液相色谱的分类 * 分离 机理 吸附色谱——吸附能力强弱不同 分配色谱——溶解、吸收或吸着能力差异 离子交换色谱——离子交换剂上的亲和力不同 凝胶渗透色谱——在多孔固定相中的选择渗透 液固吸附色谱 * 液—固吸附色谱是以固体吸附剂作为固定相，以不同极性溶剂为流动相，吸附剂通常是些多孔的固体颗粒物质，在它们的表面存在吸附中心。液固吸附色谱分离的实质是根据物质在固定相上的吸附作用强弱不同来进行的。 Flow 流动相 固定相 液固吸附色谱 活性吸附点 液固吸附色谱-分离原理 * 当流动相通过固定相（吸附剂）时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。当试样分子（X）被流动相带入色谱柱内，只要它们在固定相上有一定程度的保留，就要取代数目相当的已被吸附的流动相分子，于是，在固定相表面发生竞争吸附: X + nSad = Xad + nS 液固吸附色谱-分离原理 * 达平衡时，有 其中Kad为吸附平衡常数，值大表示组分在吸附剂上保留强，难于洗脱。Kad值小，则保留值弱，易于洗脱。试样中各组分据此得以分离。 液固吸附色