表面抗原试验.DOCVIP

FACSArray 应用：表面抗原实验 选择实验助手 实验助手会帮助你创造一个实验的范本，只要用户回答一系列的问题。每次回答的流程可以被储存，日后若要建立类似的模版，可以直接打开应用。 在工具栏(Figure １)()。实验助手对话框将出现，自动转至下图所示画面(Figure 2)。 如果您是建立第一次的模版，请选择预定的「Default Wizard」「Next」。画面出现如下对话框(Figure 3)。 选择一个实验范本 「Experiment Creation Wizard」 从模版下拉式菜单中，选择「2 Color」Next。画面出现「Instrument Setup and Optical Spillover」对话框，如下所示 (Figure 4)。 输入样本信息 FACSArray软件可以自动计算光谱交叠造成的干扰，需要用户提供适当的对照组。一般而言，每个实验需要一个未染色的阴性对照（通常放A1）） 按「Yes」 选择您需要的颜色。 按Next。「Number of Samples」的画面会出现。 输入数字「1」「Sample Identification」的画面会出现。 在此我们将保留预定的命名Sample_001。 输入微孔资讯 按Next，「Number of Wells per Sample」的画面会出现。 输入每样本微孔数目，这个实验里，我们输入5；按Next。「Well Names」的画面将会出现(Figure 5)。 在每个微孔栏内输入适当的名称。 按Next。「Fluorophore Labels」(Figure 6)。本对话框将允许您输入适当的荧光参数，将出现在图谱的X、Y轴标签上。 为「CELLS-UNTREATED」样本输入以下荧光参数：7 AAD(为远红色Far Red)、Annexin V-APC(为红色 Red)。 按「Enter」。 选择附加的选项 按Next。「Custom Keywords」的画面会出现。我们在此范例中，不使用关键字功能。 按Next。「Adjusting Plate Layout」(Figure 7)。用户可以在此规划、安排96孔板上样的顺序。 这个例子中，我们在下拉式菜单中选择「Contiguous Horizontal」 上样和获取设定 按Next。「Loader Settings」的画面将会出现(Figure 8)。 在此我们保留预定的Loader设定；按Next。「Acquisition Settings」 在此我们保留预设的获取条件，即全部细胞取得5,000颗粒后，即可停止该微孔的采集。 按Next。「Experiment Name」(Figure 9)。 储存实验和实验助手 输入Apoptosis Experiment，作为此实验范本的档名。 按Next。「Saving Wizard Session」的画面出现。我们在此范例中选择不存储实验助手流程。 按「No」 用户可以在此回顾所完成的选项。 确认后，按Finish。刚才完成的实验模版将在「Prepare」 再次确认实验模版 在「Prepare」「Prepare」()，以选择进入「Prepare」(Figure 10)。注意：例图中前三孔是Setup微孔，这些孔将被用来优化仪器设定和自动计算补偿。 按A1 在「Inspector」Acq标签，并修改以下两项获取参数：(a) 将上样速率由2.0μL/sec减小到0.5μL/sec(此为最小值)；(b)提高样本抽取量，由20μL到100μL ()。按「Enter」。 如有需要可重复步骤3，为其它Setup微孔(A2与A3) 修改获取参数。 按储存按钮()以储存修改后实验模板。 仪器最佳化 (Setup工作空间) 装载样品 制备样品，并确实装载约250 μL的样品至下列微孔。 A1: Cells-Treated A2: 7-AAD-Treated A3: Annexin-Treated A4: Cells-Untreated A5: 7-AAD-Untreated A6: Annexin-Untreated A7: Annexin/7-AAD/Untreated A8: Annexin/7-AAD/Treated 装载96孔板 在应用工具栏，按一下「Setup仪器设定」工具钮()，以进入「Setup仪器设定」工作空间。此时会见到96孔板布局图，且Setup微孔是被选定为获取模式，并有标示号码顺位(Figure 11)。 将加好样品的96孔板装载到定位，A1微孔放在Loader上标示A1处的正上方。 在Loader控制区上，按「Load」钮。(a) 假如Loader没有侦测到盖子，96孔盘会被完全地收入主机内。(b) 在仪器状态Status区上，将显示「I