[理学]核酸理化性质 四川理工学院.pptVIP

4.4 核酸和核苷酸的性质 (Section 4 Properties of Nucleic acid and Nucleotide) 一、溶解性（Solubility） ① RNA、Nt、Ns和Base纯品为白色粉末或结晶体。 ② DNA为纤维状固体。 ③ 核酸为极性物质，核苷酸和核苷可溶于水。 ④ 核酸大多与蛋白质结合成和蛋白。在不同的盐浓度下，DNA蛋白（DNP）和RNA蛋白（RNP）溶解度不同。 核蛋白 + 1mol/L NaCI→ DNP溶解 + RNP ↓ 核蛋白 + 0.14 1mol/L NaCI → DNP ↓ + RNP溶解 (低盐DNP不溶，高盐RNP不溶) 核蛋白 在pH4.2（pH = pI）时，DNP ↓，RNP溶解 核蛋白 在pH2～2.5 （pH = pI）时， RNP ↓ ，DNP溶解 二、核酸及其组分的两性性质 1. 碱基解离，第一位都在N上, 解离位点： A：在N1解离， G：在N7解离， U：在N3解离， T：在N3解离， C：在N3解离， 2. 核苷（Ns）解离 糖的存在使N解离pK值降低，而糖上－OH的解离无足轻重（pK 在12 以上） 3. 核苷酸（Nt）解离 Pi有两次解离，pK′＝0.7～1.6 pK′＝6.1～6.5 Nt含碱基和Pi，为两性电解质，当正、负解离速度相等时，该pH即为pI，（U、T除外,不带电荷） pI = (pK′+ pK′) / 2，pK′为Pi第一解离，pK′为 N解离 eg. AMP pI = (0.9+3.8) / 2 = 2.35 了解Nt的解离及pI ，在制备及分析中极有帮助。 2. 核苷（Ns）解离 糖的存在使N解离pK值降低，而糖上－OH的解离无足轻重（pK 在12 以上） 3. 核苷酸（Nt）解离 Pi有两次解离，pK′＝0.7～1.6 pK′＝6.1～6.5 Nt含碱基和Pi，为两性电解质，当正、负解离速度相等时，该pH即为pI，（U、T除外,不带电荷） pI = (pK′+ pK′) / 2，pK′为Pi第一解离，pK′为 N解离 eg. AMP pI = (0.9+3.8) / 2 = 2.35 了解Nt的解离及pI ，在制备及分析中极有帮助。 4、核酸分子的解离（Dissociation） 核酸和多核苷酸链除了末端磷酸残基外，磷酸二酯键中磷酸残基只有一个解离常数， pK1 =1.5 三、紫外吸收(260nm，定性和定量分析) 但分子量差异大，纯质不一，难以用NA重量浓度来表示其消光系数，故常用摩尔磷消光系数. ε(p)—每升溶液中含1mol 磷的核酸溶液（pH=7）的消光系数。 260nm: DNA=7,000～10,000 RNA=6,000～8,000 在核酸分子中，由于嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键体系，因而具有独特的紫外线吸收光谱，一般在260nm左右有最大吸收峰，可以作为核酸及其组分定性和定量测定的依据。 四、核酸的变性与复性（Denaturation and renaturation of NA） （一） Denaturation of NA ① 定义: NA受热、酸碱、有机溶剂、辐射、及尿素等变性剂作用，皆引起变性，所谓变性：氢键断裂，双螺旋结构解开，从而引起紫外｛ε(p) ｝增加（hyperchromie effect ，增色效应）、失去生物活性、粘度下降（双股－无规线团）（与pr反）、比旋下降 等性质改变的过程叫变性。(与降解不同，无共键的断裂) 4.5 Nt类物质的制备及应用 一、 核酸组分Nt、Ns和Base的制备 （一） 降解方法 ① 酸解NA，直接得碱基（或无嘌呤酸），糖苷键断。PuPy （purine）（pyrimidine）；deoxyoxy ② 碱解RNA（0.3～1M NaOH），得2, 3 环式Nt，进一步生成 2′或 3 Nt、Ns ( Nt 代表核苷酸， Ns代表核苷的缩写） DNA无2-OH，不能生成2, 3 环式Nt，相对抗碱。