[畜牧兽医]博士论文答辩.ppt

博士论文答辩检测QNs残留确证方法的建立和恩诺沙星代谢的比较研究 饶 勇 导师:曾振灵 教授 陈杖榴 教授 基础兽医学兽医药理学及毒理学 检测QNs残留确证方法的建立和恩诺沙星代谢的比较研究 第一章 LC-MS/MS检测QNs在牛奶和鸡蛋中残留方法的建立及应用 第二章 恩诺沙星在大鼠、猪、山羊和鸡体内代谢和排泄的比较研究 第一章 LC-MS/MS检测QNs在牛奶和鸡蛋中残留方法的建立及应用 背景 技术路线 方法 结果与分析 结论 1 背景1.1 概况 氟喹诺酮类 (fluoroquinolones, FQs) 是第三代喹诺酮类(quinolones, QNs) ，是继磺胺类药物之后在合成抗菌药物方面最重要的突破 FQs是兽医临床上应用最广泛的化学治疗药物。 1.2 QNs残留所引发的问题 病原微生物耐药性的增加 关节炎 光敏毒性 过敏 肝肾损伤 影响国际贸易 1.3 国内研究现状 农业部公告第236号（2003）3种检测QNs的HPLC方法 王国文等（2002）建立了4种FQs在鳗鱼中残留的HPLC方法。 刘媛等（2004）建立了4种FQs在鸡蛋中残留的HPLC方法。 董琳琳等（2005）建立了4种FQs在鸡的肌肉、皮+脂肪、肝和肾中残留的HPLC方法。 1.3 国内研究现状 董爱国（2003）建立了9种FQs在鸡蛋中残留的HPLC方法 林保银（2005）建立了11种QNs在牛奶和动物组织中残留的HPLC方法 林峰等（2004）建立了4种FQs在烤鳗中残留的LC-MS/MS方法 施冰等（2004）建立了7种FQs在鳗鱼、虾和罗非鱼中残留的LC-MS/MS方法。 1.4 国外研究现状 欧盟（1994）检测环丙沙星和恩诺沙星在猪肉、熏肉和牛肉中残留的HPLC方法 Verdon et al (2005)建立了10种QNs在牛奶、牛肉、猪肉、猪肾、猪肝、鱼肉和皮、禽肉和蛋共8种基质中残留的HPLC方法 Yorke Froc (2000)建立了检测鸡组织中的9种QNs残留的HPLC方法 Pecorelli et al (2003) 建立了检测饲料中13种QNs的HPLC方法 1.4 国外研究现状 Volmer et al（1997）用LC-MS/MS检测鱼肉、奶和人尿中15种QNs及其CIP的代谢物 Schneider et al 用HPLC-FLD定量和LC-MS?确证鸡肝和肌肉中(2002) 和鸡蛋（2003）8种FQs的残留 欧盟联合研究中心参考物质与测量研究所(EC-JRC-IRMM)建立了检测猪肾脏中11种QNs残留的LC-MS/MS法 (Van Vyncht et al,2002; Toussaint B et al, 2002, 2005a, 2005b) 1.4 国外研究现状 Turnipseed et al (2003)报道了检测水产品中4种FQs、3种氯霉素类、四环素类、磺胺类和甲氧苄胺嘧啶等残留的LC-MS/MS方法 Yamada et al (2006)研究了111种在牛肉、122种在猪肉和123种在鸡肉残留的LC-MS/MS方法 。包括抗生素、合成抗菌剂、抗寄生虫药、激素类药物及其它们的一些代谢物 1.5 本研究的目的意义 本文建立了13种QNs在牛奶和鸡蛋中残留的LC-MS/MS方法，旨在为我国开展此类药物的残留监控作检测方法准备 2 技术路线： 残留分析方法的建立 2 技术路线：残留分析方法的验证 3 方法3.1 样品前处理：提取 3.1 样品前处理：Strata-X SPE 3.2 测定条件：LC-APCI-离子阱 液相条件 色谱柱： ODS2 (150×2.0 mm, 5 μm)；保护柱: C18，2.0 mm I.D.； 流动相: A, 0.05%三氟乙酸; B, 乙腈； 梯度洗脱: 0-1 min, 20% B; 1-10 min, 70% B; 流速: 0.3 ml.min-1； 进样量, 20 μL。 质谱条件 液相色谱-质谱联用仪（Finnigan）：LCQ Deca离子阱质谱仪，P4000液相系统 。 APCI正离子模式,气化温度: 450 ℃，毛细管温度: 160 ℃，壳气：N2 65。 3.2 测定条件：LC-ESI-串联四极杆 色谱柱：NUCLEODUR C18柱，125 mm × 2.0 mm（id），粒度3 μm。保护柱：C18, 4 mm×3.0 mm (i.d)。 流动相：A液：0.1%（v/v）甲酸/乙睛；B液：0.1%(v/v)甲酸/水。流动相A液变化：0～10.00 min，13.0%～80.0%；10.01 min，13.0%，维持至