[经济学]第十四章 基因工程与蛋白质工程.pptVIP

第十四章 基因工程与蛋白质工程 学习目的与要求 了解生物工程的概念及研究技术；了解生物工程在化学、医药及环保中的应用。 了解目的基因取得的方法；了解基因载体的作用；了解DNA重组体构建的步骤。 理解蛋白质工程的概念、研究内容及范畴；了解蛋白质工程的一般技术；了解蛋白质工程的应用。 第一节 生物工程概述 一、基本概念 是对不同生物的遗传物质(基因),在体外人工剪切、组合和拼接，是遗传物质重新组合，然后通过载体（质粒、噬菌体等），转入微生物或高等生物细胞内，进行无性繁殖（克隆），并使所需基因（目的基因）在细胞内表达，产生出人类需要的新产品或新药物。基因工程主要涉及DNA复制、转录和表达，是分子水平的一种操作技术。 基因工程——在分子水平的遗传操作技术 细胞工程——遗传物质在细胞内的转移。包括细胞融合、核移植、细胞培养等技术。 酶工程——酶的改造与设计。包括酶的开发与生产、酶的固定化和酶分子改造与新酶研制。 生化工程——生物工程产品的最终取得手段 发酵工程——发酵菌株选育、发酵过程控制与产品分离技术。 二、生物工程主要研究内容 带有目的基因DNA片断的获得 DNA片段与载体DNA体外重组 重组体转入受体细胞 从受体细胞中筛选和鉴定接受了重组DNA细胞 外源基因在受体细胞内表达 第二节 基因工程 基因工程(genetic engineering) 所谓基因工程(genetic engineering)就是把外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制，转录，翻译表达的操作叫基因工程。 基因工程可使另一种生物获得新的遗传性状或表达所需要的产物。 PCR(多聚酶链式反应) 分子刀-DNA限制性内切酶 重组DNA的操作 载体 载体是运送目的基因片段进入宿主细胞的工具， （1）能够自我复制，并带动插入的外源基因一起复制 （2）具有合适的限制性酶切位点 （3）具有合适的筛选标记 （4）细胞内拷贝数要多 （5）载体的分子量要小 （6）细胞内稳定性高 目前最常用的载体包括细菌质粒、l噬菌体、cosmid质粒等。 质粒载体的一般结构 DNA克隆常用载体 宿主菌或受体细胞 大肠杆菌 酵母 昆虫细胞 哺乳动物细胞 感受态细胞（competent cell） 筛选克隆 鉴定克隆---Southern分子杂交 第三节 蛋白质工程 第二节 蛋白质工程简介 生物酶工程示意图 蛋白质技术和核酸技术的相互增强 胰岛素原的人工合成 重组DNA技术的一般操作步骤有：(1)获得目的基因；(2)构建重组质粒；(3)转化受体细胞；(4)筛选和鉴定转化子；(5)培养转化细胞获得所需性状或所需产物。 获得目的基因的方法有：提取总DNA构建基因文库并从中调用；以mRNA为模板合成互补DNA片段；利用PCR特异性扩增所需目的基因片段等。用紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。 用限制性内切酶识别并切开核酸序列特定位点，将外源基因插入到载体中，用重组载体转化宿主细胞，外源基因将随宿主的繁殖而复制，这种过程称为基因的克隆。 凝胶电泳是用于分离、纯化和鉴定DNA片段最常规的实验技术。可依据DNA分子的大小来使其分离。还可以利用DNA杂交技术直接鉴定带有重组质粒的细菌克隆。 利用载体法或基因直接转移等技术将外源目的基因转入合适的宿主细胞中进行表达，获得所需表达产物或所需性状。用Southern杂交对转基因生物外源目的基因进行检测分析。 思考题 1、基因工程、细胞工程、酶工程、生化工程和发酵工程的概念及主要研究内容。 2、克隆载体包括哪些基本的结构元 件, 简述DNA克隆的过程? 3、简述蛋白质技术与核酸技术间的关联。 基因克隆获得大量目的基因后，就要使其在合适的宿主细胞中表达，产生需要的基因表达产物或使宿主生物具备所需的性状，同时目的基因还能在宿主细胞中稳定遗传。这一过程就是遗传转化。 若需要让克隆的基因表达和产生大量编码蛋白，可对转化的大肠杆菌进行培养使目的基因大量表达和积累。对表达产物分离纯化便可获得想要的产品。 通过DNA体外重组技术构建的重组质粒还可以直接用以转化蓝藻等原核生物或其他一些原生生物。 四、转化受体细胞和转化子的筛选 受体细胞和重组基因的导入（转化或转染） 将目的基因克隆到大肠杆菌细胞中的操作步骤： 1．获得目的基因和质粒载体； 2．形成重组质粒； 3．制备感受态细胞，用重组质粒转化大肠杆菌细胞； 4．培养大肠杆菌，让重组质粒及外源目的基因形成大量拷贝； 5．筛选含重组质粒的大肠杆菌细胞，进行检查或鉴定。 pUC118质粒的多克隆位点整合在lacZ基因中，该位点如果没有插入外源目的基因，lacZ基因便可表达出?半乳糖苷酶，如果平板培养基中含有IPT