杂交育种教学幻灯片.pptVIP

第三节 酵母菌的杂交育种 二、酵母菌的生活史和繁殖方式 无性繁殖 有性繁殖 芽殖(bidding) 裂殖(fission) 产无性孢子 产子囊孢子(ascospore) 节孢子 掷孢子 厚垣孢子 S.cerevisiae(酿酒酵母)的生活史 （一）标记菌株的选择 常用的标记：营养缺陷型或抗性突变基因、也可根据菌落和细胞形态特征作为标记，如菌落形状、大小、细胞的形状、大小及色素等都是常用的杂交标记。 酵母菌杂交配对亲株的确定：选择各具优良遗传特性的原始亲本——从两个原始亲本中分别选出不同接合型的单倍体菌株或单倍的子囊孢子——诱变剂处理单倍体菌株，从中获得带有不同营养缺陷基因的亲本菌株。 如果杂交采用菌落或细胞形态作为遗传标记，那末配对的亲株可以直接选用原养型单倍体细胞进行杂交。 第四节 酵母菌的杂交育种 （二）酵母杂交方法 ——子囊孢子的制备，子囊孢子的分离和杂种的获得等。 子囊孢子的制备 采用营养成分贫乏的生孢培养基，使二倍体酵母菌细胞在饥饿情况下发生减数分裂而形成子囊孢子。 获得游离的孢子的方法： （1）采用蜗牛酶处理，水解子囊壁，然后剧烈震荡，释放出子囊孢子，接着加入液体石蜡，摇匀后孢子就聚集于液体石蜡层； （2） 用蒸馏水洗下斜面的子囊，加入1ml液体石蜡和5g硅藻土，在玻璃匀浆器中研磨10min左右，于4500r/min离心10min，破壁后被分离的子囊孢子集中到石蜡层。取含有子囊孢子的石蜡0.05ml，加入15%明胶0.05ml，在琼脂平板上涂布培养，可得到单倍体菌落，移入斜面，经单倍体检验后备用。 2. 杂交 常用的杂交方法： 群体杂交 （1）把带有遗传标记的两亲本单倍体菌株移接到完全培养液中，混合培养过夜，使两亲株细胞在生长中充分接合，然后把混合液分离到基本培养基平板上，培养后形成二倍体的杂交菌落； （2）把两个不同接合型的单倍体亲株细胞以等量混合接种于完全培养液（如麦芽汁培养基）中，适温培养过夜，大约从6h开始形成接合子，如在显微镜下可见到已产生的接合子，其形状似哑铃状，大多数情况下，接合后第一个芽往往从双亲细胞接触融合处首先长出来，这可与接合的单亲细胞出芽状况相区别； （3）当杂交的双亲均为原养型单倍体时，可取已混合培养5—7h且有接合细胞产生的培养液，划线接种或平板分离到基本培养基上，适温培养后形成菌落，要注意观察其中大菌落的形成，这些大菌落可能就是异接合型的二倍体杂种，见下表。 测定项目 单倍体 二倍体 细胞大小 菌落形态 液体培养状态 在孢子培养基上 小，球形 小，形态不一 繁殖较慢，细胞多聚集成团 不能形成子囊 大，椭圆形 大，形态一般 繁殖较快，细胞较分散 能形成子囊 表- 酿酒酵母单倍体和二倍体细胞的区别 同宗菌株的杂交 常利用蜗牛酶或蘑菇浸出液中的酶类来水解子囊壁，破壁后的子囊释放出子囊孢子，然后杂交。 酵母杂交和其他微生物的杂交重组一样存在一个共同问题，种间杂交比属间易于获得产量提高的重组体。种间杂交遗传特性比较稳定，属间杂交产物易于发生分离。 第四节 霉菌的杂交育种 霉菌在自然界分布很广，与人类生活密切相关，如产黄青霉（Penicillirm chrysogenum）、荨麻青霉、扩展青霉等是抗生素和酶制剂工业上的重要生产菌种。 真核微生物杂交的发现是在细菌之后。1953年报道了构巢曲霉（Aspergillus nidulans）的准性生殖。此后利用真菌的准性生殖进行杂交的研究得到很快发展，尤其是不完全菌纲中的微生物繁殖方式主要是准性生殖，而其中许多霉菌又都是发酵工业产品的主要菌种。通过杂交来提高菌种发酵水平，改善品质具有重要意义。 以青霉菌为例，分析霉菌的杂交育种过程 一、霉菌的细胞结构和繁殖 1.霉菌细胞结构 由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、核糖体、内质网及各种内含物（肝糖、脂肪滴、异染粒等）等组成。 幼龄菌往往液泡小而少，老龄菌具有较大的液泡。 ：除少数低等水生霉菌细胞壁含纤维素外,大部分霉菌细胞壁主要由几丁质组成. 几丁质是由数百个N-乙酰葡萄糖胺分子以β-1，4糖苷键连接而成的。几丁质和纤维素分别构成高等和低等霉菌细胞壁的网状结构—微纤丝。微纤丝使细胞壁具有坚韧的机械性能。 霉菌的细胞膜、细胞核、线粒体、核糖体等结构与其他真核生物（如酵母）基本相同。 细胞壁 由许多菌丝相互交织而成的一个菌丝集团称菌丝体 营养菌丝体——密布在固体营养基质内部，主要执 行吸收营养物功能的菌丝体 气生菌丝体——伸展到空间的菌丝体 这两类菌丝体在长期的进化中，因其自身的生理功能和对不同环境的高度适应，已明显地发展出各种特化的构造。 菌丝体及其各种分化形式 指在其里面或上面可产生无性或有性孢子,有一定形状和构造的任何菌丝体组织 菌落特征：