HBeAg全自动操作规程.doc

乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 文件编号 编写者 审核者 批准者 医院 医院： 科： 室： 乙肝病毒e抗原诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共3 页 第 1 页 1.原理 HBeAg试剂盒(IFMA法)是双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法，采用多克隆抗-HBeAb包被反应板，用铕标记单克隆抗-HBe，加入待测样本后，样本中HBeAg与已包被在板上的多克隆抗体结合成抗-HBe-HBeAg复合物，再加入铕标记物抗-HBe-DDTA-Eu后，与已结合在板上的HBeAg联接成抗-HBs-HbeAg-抗-HBe-DDTA-Eu复合物。增强液(β—NTA)将复合物上的Eu3+离子解离到溶液中，并与增强液有效成分形成高荧光强度的螯和物，荧光强度和样品种的HBeAg浓度成正比。通过测定荧光强度，测定血清样本中的乙型肝炎病毒e抗原。 2.样本处理 血液样本尽快送实验室，室温下离心分离出血清，置于洁净离心管中保存。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司乙肝病毒e抗原（HBeAg）时间分辨免疫荧光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下： 校准品A-F(1.5ml/瓶,6瓶) 铕标记物：1瓶(1.5m1)，使用前按需求量做1：20倍稀释 铕标记稀释液：1瓶(30 m1) 微孔反应板：一块(12*8) 说明书：1份 医院： 科： 室 乙肝病毒e抗原诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 2 页 4.仪器（用户自备） 时间分辨荧光分析仪； 微孔洗涤机； 微孔振荡器； 5.操作步骤 试剂的准备：将浓缩洗液做1：25倍稀释，作为工作洗涤掖；使用前一小时内将铕标记物按所需量1：20倍稀释并一次用完（使用一次性的塑料容器来配制）。 将试剂及所需数量的微孔反应条置室温(20—25℃)平衡。 取100ul的校准品及待测样本，按顺序加入微孔反应条小孔中。 在室温下，用振荡器缓慢震荡孵育40分钟。 在第一次孵育结束后，用微孔洗涤机洗涤4次后拍干。 每孔加入100u1已稀释的铕标记物工作液。 在室温下，用振荡器缓慢震荡孵育40分钟。 第二次孵育结束后，重复用微孔洗涤机洗涤6次后拍干。 每孔中加入增强液100u1。 微孔反应条用振荡器轻摇5分钟，检测(在半小时内完成测定)。 6.计算 6.1 本试剂CUT OFF 值为0.5PEI U／m1,建议≥CUT OFF 值的样品判断为阳性，否则为阴性 6.2 A点计数值应≤8000，F点计数值应≥80000。否则试验无效，全部试验重做。 7．临床意义 HBeAg是乙型肝炎传染性的标志，检测HBeAg有助于判断HBsAg携带着传染性强弱，母婴传播的危险率及急性乙型肝炎的预后等，HBeAg消失和抗-eAg出现显示乙型所炎病情的好转，但不能作为无传染性的指标，也不一定是对机体有益的标志(AFP与抗-HBe有相关性)。 医院： 科： 室 乙肝病毒e抗原诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 标准操作规程 版本： 执行日期： 共 3 页 第 3 页 8．参考值 0.5PEI U／m1 9．注意事项 理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。 尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。 试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。 为保证实验的准确性，处理血样时应做到没有纤维蛋白、红细胞等，并要保证血样吸取的量的准确性，否则容易引起测量值的差异。 洗板时应进行校正注液量和残留量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔中的洗涤液都注满微孔，波涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。 吸取增强液和铕标记物时，请避免尘土等不必要的污染。加增强液时吸头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂造成增强液的污染。 使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。 使用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。 如需稀释标本，请用生理盐水稀释。 所有的样本和本试剂盒应作为潜在的传染原看待，按传染病实验室检查规程操作。 如对实验结果有疑问，应重复试验。 总胆红素0.32mg/mL，甘油三脂0.75 mg/mL，血红蛋白180 mg/mL对本试剂盒无干扰作用。 本试剂盒应置2—8℃保存，以产品批号日期起有效期为一年。