[生物学]分子生物学 第3章 DNA复制.ppt

教学要求 1. 理解DNA复制的半保留机制和半不连续复制 2. 掌握细菌DNA复制过程及有重要作用的酶和蛋白质 3. 掌握真核生物DNA复制的特点 4. 掌握DNA复制的类型 主要内容 第1节 DNA复制概述 第2节 细菌DNA的复制 第3节 真核生物DNA的复制 问 题 复制开始时亲本链是完全解开的吗？ 复制可以随机起始吗？ 复制是沿一个方向还是双向进行？ 复制是从5′→3 ′还是3′ → 5，或是双向进行的？ 复制过程中有哪些酶参与？ 一、半保留机制 1. DNA复制 :亲代双链DNA分子在DNA聚合酶的作用下，分别以各单链 DNA分子为模板，聚合与自身碱基可以互补配对的游离的dNTP，合成出两条与亲代DNA分子完全相同的子代DNA分子的过程。 一、半保留机制 2.半保留复制：复制过程中各以双螺旋DNA的其中一条链为模板合成其互补链，新生的互补链与母链构成子代DNA分子 。 2、实验证据（1958 Meselson 和Stahl） DNA半保留复制的生物学意义： DNA的半保留复制表明DNA在代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。 DNA复制反应的共同特点 半保留复制 半不连续复制 有特定的复制起点 需要引物 复制真实性 复制叉双向移动，DNA合成的单向延伸， 5’ 3’ 复制受控制 一、 DNA复制所需的蛋白质和酶 1.DNA链合成的条件 底物: dATP, dGTP, dCTP, dTTP Mg++ 3’-OH primer DNA template Proteins and enzymes 2. DNA复制所需的蛋白质和酶 DNA helicase (DNA解旋酶) single-stranded binding protein (SSB, 单链结合蛋白) DNA primase (DNA 引发酶) DNA topoisomerase (拓扑异构酶) Primosome (引发体) DNA polymerase (DNA聚合酶) DNA ligase (DNA 连接酶) DNA helicase (DNA解旋酶) 利用ATP供能，解开DNA双链, 可随复制叉的伸展向前移动 大肠杆菌中解旋酶的种类 single-stranded binding protein (SSB, 单链结合蛋白) 稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 使单链DNA 呈伸展状态，无弯曲和结节，有利于作为模板 DNA primase (DNA 引发酶) 在模板复制的起始部位，以DNA为模板催化互补碱基聚合生成一小段RNA e.g. DNa G (E. coli) DNA topoisomerase (拓扑异构酶) 是一类调节DNA分子的超螺旋水平，可改变DNA拓扑性质的酶。对DNA分子的作用是既能水解、又能连接磷酸二酯键。 拓扑异构酶 I: 切开DNA双链中的一股，使DNA在解链旋转中不打结，DNA变为松弛状态再封闭切口。 同转录有关 拓扑异构酶 II: 能切断DNA双链，使螺旋松弛。在ATP参与下，松弛的DNA进入负超螺旋，再连接断端。同复制有关 Primosome (引发体) A mobile complex includes helicase (DNaA, DNaB, DNaC) and DNA primase. 由多种蛋白质及酶组成,是DNA复制开始所必需的. DNA polymerase (DNA聚合酶) DNA polymerase III DNA polymerase III 二聚体复合物 由10种亚基(αβγδδ′ εθ τχψ ) 组成不对称异源二聚体。 –核心酶（αεθ） 2.核酸外切酶活性 DNA ligase 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，形成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成完整的链。反应需要ATP。 二、 DNA复制的过程 (1) Initiation (起始) (2) Elongation (延伸) (3) Termination and segregation (终止与分离) (1) Initiation (起始) 识别原点 分开双链，稳定单链 通过引发体起动子代链的合成反应 (3) Elongation (延伸) DNA聚合酶III合成前导链和滞后链 DNA polymerase I切除RNA引物，补齐空缺的碱基 DNA ligase 连接冈崎片段. (4) Termination and segregation (终止与分离) Termination(终止) Ter