[生物学]转基因植物.ppt

转基因植物 内容提要 第一节 转基因植物研究进展及应用 第二节 植物转基因方法 第三节 植物转基因的筛选及检测 第四节 转基因植株的安全 第一节 转基因植物研究进展 一、研究进展 1、自1984年植物转基因首次在烟草上获得成功以来，植物遗传转化的发展异常迅猛。在短短十几年里，已经有35个科的120多种植物转基因获得成功。 2、在全球45个国家中已经完成和正在进行的转基因作物的田间试验已超过25000例，这些试验涉及60种作物的10类经济性状的改造。 3、1996年全球转基因植物种植面积不足2000万亩。2001年已近8.0亿亩。近几年每年递增1亿亩。其中美国的转基因植物种植面积接近3/4。 4、2001年种植的7.89亿亩转基因植物中，大豆、玉米、棉花、油菜所占比例分别为63%、19%、13%、5%，转基因大豆、玉米、棉花、油菜的种植面积分别占该作物总种植面积的46%、7%、20%、11%。 5、我国转基因植物的研究也在迅速发展，一些转基因植物已达到了商品化，到2008年我国转基因抗虫棉面积已达5700万亩。 以色列Newe Yaar研究中心的Efraim Lewinsohn和同事。他们向西红柿中导入了一种柠檬罗勒基因，该基因能够制造一种香叶醇合酶，从而使西红柿产生类似柠檬的芳香气味。 第二节 植物转基因的方法 1.目的基因的分离 2.载体构建 3.导入细菌并利用细菌繁殖扩增重组DNA 4.对植物组织或细胞进行转化 5.植株再生 6.转基因植株的鉴定 7.转基因植株的种植 植物转基因的受体系统 1．植物组织受体系统： 受伤的细胞容易受到病毒或质粒的感染。这些病毒或质粒上的某些DNA通过各种不同的方式转移到受伤的植物细胞，并形成愈伤组织。愈伤组织可以培养成完整的转化植株。该受体系统转化率高，可获得较多的转化植株，取材广泛、适用性广。 缺点：转化的外源基因稳定性差，嵌合体多。 2．原生质体受体系统： 是植物细胞除去细胞壁后的部分，是一个质膜包围的“裸露细胞”，具全能性。原生质体在体外比较容易完成一系列细胞操作或遗传操作，互相之间可以发生细胞融合，而且还可以直接高效的捕获外源基因，嵌合体少。 缺点：遗传稳定性差，培养周期长，难度大，再生频率低。 3．生殖细胞受体系统： 以植物生殖细胞花粉细胞为受体细胞进行基因转化的系统。如花粉管导入法。具有全能性的生殖细胞直接为受体细胞，具有更强的接受外源DNA的潜能，一旦将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。 优点：利用植物自身受粉过程，操作方法方便、简单。 缺点：转化受到季节的限制，只能在短暂的开花期进行，且无性繁殖的植物不能采用。 外源基因导入植物的方法 （一）DNA直接转移法 1.化学刺激法 植物原生质体借助一些化学试剂（如PEG、氯化钙等）的诱导能吸收外源DNA、质粒等遗传物质，并有可能整合到植物染色体上去。 此法对细胞伤害少，可避免嵌合体产生，易于选择转化体，受体细胞不受种类限制。 2.电击法 首先是将原生质体在溶液中与DNA混合，利用高压电脉冲作用在原生质体膜上“电激穿孔”，形成可逆的瞬间通道，从而促进外源DNA的摄取。此法在动物细胞中应用较早并取得很好效果，现在这一方法已被广泛用于各种单、双子叶植物中，不但原生质体而且完整的单细胞也可利用此法， 3.显微注射法 显微注射进行基因转化是一种比较经典的技术，其理论和技术方面的研究都比较成熟。特别在动物细胞或卵细胞的基因转化，核移植及细胞器的移植方面应用很多，并已取得重要成果。植物细胞的显微注射在以前使用很少，但近年来发展很快，并在理论技术上有所创新。 4.基因枪法 克莱因（Klein）等1987年首次用基因枪轰击洋葱上表皮细胞，成功地将包裹了外源DNA的钨弹射入其中，并实现了外源基因在完整组织中的表达。 这一方法要使用基因枪，枪管的前端是封口的，上面只有直径1mm左右的小孔，弹头不能通过。 具体操作是将钨粉或其它重金属粉在外源DNA中形成悬浮液，则外源DNA会被吸附到钨粉颗粒的表面，再把这些吸附有外源遗传物质的金属颗粒装填到圆筒状弹头的前端，起爆后，弹头加速落入枪筒，在枪筒口附近被挡住，而弹头前端所带的钨粉颗粒在惯性作用下脱离弹头，以高速通过1mm的小孔直接射入受体，其表面吸附的外源DNA也随之进入细胞。也可以用高压放电或高压气体使金属粒子加速。 基因枪法进行遗传转化的步骤： 1、靶细胞或组织的预处理：渗透压调节（甘露醇、山梨醇） 2、质粒DNA的提取与纯化 3、微弹头的制备（质粒DNA浓度、金粉