[医学]免疫球蛋白.ppt

Fv、ScFv的大小约为全分子的1/6。 (2)Fv 或 ScFv Fv ScFv 连接肽 即为VH，约为完整分子的1/12。它只由一个结构域构成，故称单域抗体。单域抗体尽管亲和力有所降低，但仍保持着原单抗的特异性。 (3)单域抗体 VH 4 双特异抗体和多价抗体 　　 　　双特异性抗体(bispecific antibody,BSAb)是指能同时识别2种抗原的抗体。 抗体库技术是用基因工程方法把人或其他动物的全部抗体的轻、重链可变区基因克隆出来，在原核载体上表达，然后筛选出所需的特异基因和抗体。 5 抗体库技术 重点掌握 1.抗体和免疫球蛋白的概念、 2.免疫球蛋白的基本结构、功能区及其功能、 3.抗体的生物学活性、 了解：五类免疫球蛋白的特点与功能。 4.ELISA法的主要类型及基本原理 5.胶体金免疫快速检测法的主要类型及基本原理 6.多克隆抗体及单克隆抗体 2.酶联吸附免疫分析（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA） 属于非均相免疫分析的代表，普遍应用于各领域。 基本原理：是将过量抗体（抗原）包被于载体上，通过抗原抗体反应使酶标记抗体（抗原）也结合在载体上，经洗涤去除游离的酶标记抗体（抗原）后，加入底物显色，定性或定量分析有色产物确定待测物的存在与含量的检测技术。 1）双抗体夹心法 方法：用已知抗体包被，加入待检样品，再加酶标抗体，加底物显色 应用： 二价或二价以上的较大分子抗原测定 如乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等 获得待分析物的未标定抗体 将特异性抗体与固相 载体连接形成固相抗体 洗涤除去未结合的 抗体及杂质 加入封闭蛋白溶液以封闭载体 表面残留的蛋白结合位点 洗涤并除去未结合的封闭蛋白 加受检标本（抗原）形成 固相抗体－抗原复合物 洗涤除去其他 未结合的物质 加酶标抗体生成 抗体—待测抗原—酶标记抗体 的复合物 彻底洗涤 未结合的 酶标抗体 加底物进行 酶催化反应 根据颜色反应的 程度进行该抗原 的定性或定量测定 2）间接法 方法：利用酶标记的抗抗体以检测已与固相上抗原结合的受检抗体 应用： 常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定 包被 反应 加入待测抗体或 抗原和酶标抗原 或抗体 1 2 3）竞争法方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。 应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等） ELISA试剂盒 1）干燥试纸条 （三）胶体金免疫快速检测法 2）加样 1.双抗体夹心法-大分子抗原 3）反应和迁徙 4）阳性结果：两条红线 5）阴性结果：一条红线 样本加到S区，进入B区和B区的金标抗体发生免疫反应，再层析到T线位置时，如果样本中含有待测抗原，则T线不显色或显色很淡，C线显色，这样得到的是阳性结果。当待测样本中不含抗原时，再层析到T线位置时，则T线显色，C线也显色，得到阴性结果 S B T C D 2.竞争抑制法 ???????????????????????????????????? 能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗HIV抗体的检测。 （四）免疫印迹法 第五节 抗体生成技术 整体水平抗体生成技术 细胞工程抗体生成技术 基因工程抗体生成技术 多克隆抗体（抗血清） 单克隆抗体 嵌合抗体、改形抗体 组合抗体库技术 噬菌体抗体库技术 Ig基因转基因小鼠 抗体真核表达技术 一、多克隆抗体（polyclonal antibody） 给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物, 它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的, 称为多克隆抗体. 存在问题 特异性差, 用于免疫学检测容易出现交叉反应 传统抗血清 抗 原 免 疫 所有抗体混合 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 脾 脏 淋巴結 B 細胞 制备过程 传统抗血清的交叉反应 专一性反应 沒有反應 交叉反应 + - ? 1 2 3 Ag A x y z Ag B 1’ 2 0 Ag A’ 1 2 3 1 2 3 1 2 3 二、单克隆抗体（monoclonal antibody） 通过B细胞杂交瘤技术, 获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体. 可生产有用抗体的 淋巴細胞 若与 癌细胞融合，则形成稳定而可培养的细胞株。 癌细胞 可培养生长 浆细胞 B cell 可分泌抗体 融合瘤 Hy