第七章薄层色谱法-2013.pptVIP

第七章 薄层色谱法 色谱概念 色谱法（Chromatography）亦称色层法、层析法等。 色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。 1.2 色谱的发展史 几类色谱分离法的比较 色谱的其他分类方法 平面色谱分类 　　薄层色谱法： 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻薄层色谱法 离子交换薄层色谱法 　　纸色谱法:分配 　　薄层电泳法 薄层色谱法基本原理 薄层色谱法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃板上制成薄层板，试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。不同物质上升的距离不同而形成彼此分开的斑点从而达到分离。 7.2 薄层色谱法参数 （一）定性参数 1. 比移值Rf(retardation factor；Rf) 溶质移动的距离与流动相移动距离之比 图示 Rf范围： 0 Rf 1 Rf = 0.2~0.8（常用） Rf = 0.3~0.5（最佳）next L0 back 2. 相对比移值Rs (relative Rf；Rr) 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Rs与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 相对比移值(Rr) （二）面效参数（理论塔板数和塔板高度） 1、理论塔板数 N=16(D/W)2 D:原点到斑点中心的距离 W：组分斑点的纵向宽度 2、塔板高度 H=L0/n L：原点到展开剂前沿的距离 n越大，H越小。 1.分配系数K（distribution coefficient） K=cs/cm 溶质在固定相与流动相浓度比值 2.容量因子 k= CsVs/CmVm= K( Vs/Vm) 固定相中溶质总量与流动相中溶质总量之比 设一个分子，它在色谱柱中停留总时间为1，在流动相中停留的时间为R，则该分子在固定相中停留时间为(1－R)，即分子在固定相中时间与在流动中时间之比为(1－R)/R， 对于大量分子的统计行为而言，CsVs溶质分子在固定相中物质量。 CmVm表示溶质分子在流动相中的物质量，溶质分子在固定相与流动相中物质量之比等于溶质分子在固定相与流动相中的时间之比， 　　　　　(1－R)/R＝CsVs/CmVm R为溶质分子在流动相中的时间，因为分子只有出现在流动相中才能向前移动，t 是溶质分子经过色谱柱所需时间，t ‘是流动相分子流经色谱柱所需时间，所以t /t ＝1/R。综合以上两式得到。　　　　 t ＝t (1＋K′)＝t (1＋KVm/Vs) 相平衡参数 分配系数K= Cs/Cm 容量因子 k= CsVs/CmVm K、k与Rf值的关系： 　　　　　 K、 k与Rf值的关系推导 设组分分子在展开剂中的时间分数是R′，则它在薄层板上的移动速度是展开剂移动速度的R′倍， u＝R′u0， u 0是展开剂移动速度，u是组分移动速度 Rf＝L/L0=ut/u0t 定时展开时R’＝ Rf （三）相平衡参数 相平衡参数：分配系数K和容量因子k 前面推导出 R’表示单位时间内一个分子在流动相中出现的几率，也可以表示组分分子在平面上移动的速度. 讨论 ⑴ Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关，K↑大，Rf↓小 ⑵薄层板一定，Rf只与组分性质有关，对于极性组分， 展开剂极性↑大，Rf↑大（容易洗脱） 展开剂极性↓小，Rf↓小 （不容易洗脱） ⑶Rf＝1 K或k=0 组分在前沿 Rf＝0 K或k=∞ 组分在原点 （四）分离参数 分离度(resolution; R) 两相邻斑点中心的距离与两斑点平均宽度的比值 R=2(L2-L1)/(W1+W2) =2d/(W1+W2) L1 、L2 :分别为原点至两半斑点中心的距离， W1、W2斑点的宽度。 2.分离数(separation number; SN) 定义：相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之间能容纳的色谱斑点数。