[医药卫生]菌种的使用和管理.ppt

菌种的使用过程 菌种的采购 菌种的接收和储藏 冻干菌种的恢复 非冻干菌种的恢复 储备管制备 工作菌悬液的制备 质量控制及菌种编码 菌种传代示意图 菌种的使用过程 —菌种的采购 所有的商业菌种应从ATCC或CMCC授权的代理商处购买。 所有接收的菌种应保证其传代代数 （药典要求使用时不能超过5代） 菌种的使用过程 —菌种的接收和储存 菌种接收时应对以下项目进行检查: 包装完整性 菌种名称 菌种编码 批号 效期 COA 菌种的储存 严格按照说明书的要求进行储藏。 如果没有说明书，如何做？ 所有过程均需要有相应的记录， 无记录表示无任何活动！ 菌种的使用过程 —冻干菌种的恢复 冻干菌种的恢复（原始菌种或叫0代菌种） 冻干菌种处于一种深度休眠状态，生理特性受到抑制，代谢处于较低状态，必须经过恢复后才能使用，即将冻干菌种溶解后将其接种于新鲜的营养培养基上，在一定的温度下培养一段时间。 冻干菌种的恢复一般情况下按照说明书的要求进行，如无说明可以参考以下进行： 细菌类/酵母类： 菌种管外表面消毒（75%酒精）打开，吸取0.3-0.4m营养肉汤溶解后全部吸出，加入适量营养肉汤培养（细菌30-35℃18-24h；酵母菌20-25℃24-48h） 霉菌: 打开后，加入适量的无菌水溶解后全部吸出，加入适量的无菌水于20-25℃恢复2-12小时，将菌悬液接种几个改良马丁琼脂斜面上（一般用三角瓶，生长的孢子较多）， 于20-25℃7-14天，用含有0.05％Tween80氯化钠胨水洗刷到其他无菌试管中。 菌种的使用过程 —非冻干菌种的恢复 申请 申请 非冻干菌种的恢复 接种斜面----适用于短期保藏，一般细菌为1个月；真菌为2个月。 如果为第一代的菌种，参考冻干菌种进行恢复后制备储备管进行冷冻保藏。（或仅接种斜面进行传代）。 菌种恢复 干菌种(安瓿)的开启： 菌种的使用过程 —储备管的制备 申请 申请 储备管的制备 经过修复后 的原始菌种可以制备成储备管进行储存，每个冻干菌种恢复后可以制成数个储备管和一支质控管，储备管的数量依据效期及使用量来定。 按照10%的比例加入甘油做为防冻剂。 摇匀后进行分装，每支一般1-2ml。 按顺序进行编号，最后一支做为质控管进行质量控制，需进行相应的鉴别。（冷冻至少24小时后进行鉴别） 贴标签进行标识（标签参考前面，但需要有顺序号，保证每支菌种管标签的唯一性。） 低于-50℃进行冷冻保藏，效期根据实验室验证的时间来定，一般可以保存3年。 菌种的使用过程 —菌悬液的制备 申请 申请 菌悬液的制备 储备管的取用—按照顺序进行取用，保证取用的无误性。 储备管融化；商业购买的储备管按照说明进行接种 恢复: 细菌接种营养琼脂30-35℃培养18-24h；真菌接种改良的马丁培养基，酵母20-25 ℃培养24-48h；霉菌20-25 ℃培养5-7天（用0.05％Tween80胨水稀释后接种） 菌液的制备：细菌和酵母菌用氯化钠胨水进行稀释；霉菌用0.05％Tween80胨水稀释） 标识（唯一性，可以追溯） 效期：按照药典要求，菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用，若保存在2～8℃可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。 各实验室应根据自身操作习惯总结出一套切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。 菌种的使用 申请 申请 质量控制 质量控制贯穿于整个传代过程，只要有传代动作发生，则必须有质量控 制过程。 所有的过程均需要有记录。 菌种编码 编码必须具有唯一性，且可以追溯。例如： 冻干菌种编码ATCC8739/01----ATCC8739表示菌种编码；01表示接收的第一支。 储备管SV8739/01/18/1----SV代表储备管，18代表第18支储备管，1代表传代代数。 菌悬液编码D8739/01/18/1-5---5代表稀释度示2009年5月1日制备。 菌种的使用 申请 申请 菌种传代流程 S1 S2 S3 S72 QC CV Cycle 1储备管 第一代 冻存（零下50℃） WS1 WS2 WS3