第七章ph和t对酶促反应的影响.ppt

* 第七章 pH和T对酶促反应的影响 pH和T对酶反应速度的影响  pH : 是使酶变性的一个重要原因。酶常稳定在一个较窄的pH(中性pH)范围内。在极端pH(强酸碱)下，酶因相互作用减弱，对相同电符的基团互相排斥而表现不稳定，最终使酶变性失活。 其原因是基团电离作用的改变引起： ①酶分子上的催化基团的电离作用改变； ②酶分子上的结合基团的电离作用改变； ③酶分子上的其他基团的电离作用改变； ④底物分子上有关基团的电离作用改变。 第七章 pH和T对酶促反应的影响 第七章 pH和T对酶促反应的影响 7.1???????? 最适pH pH引起上面的这些变化与反应速度(V)的曲线看出，在pH较小时，v比较慢，随pH的升高，v开始上升，到某一pH值时，v达到最大，再增加pH，v反而下降而表现变性失活。 ? pH 不能作一个特征常数来看待， 就因为最适pH随[I]、T、Buffer改变 而有所不同。 第七章 pH和T对酶促反应的影响 7.2 pH对酶分子解离的影响(对最适pH的解释 例：酶分子上有N—NH2、C—COOH、 N—NH 3 +、C—COO— 假设一个酶分子上有两个基团，一个NH2、一个COOH，那么它的解离形式NH3+-E-COOH; NH3+-E-COO -; NH2 -E-COO - ? 酸性pH 最适pH 碱性pH 最适pH： 指酶的反应速度达最大时的那个中间体浓度为最大时的pH值。 第七章 pH和T对酶促反应的影响 第七章 pH和T对酶促反应的影响 所以，假设只有一种底物与酶结合，则只有上面最适pH（中间的那个离子形式）的酶与底物结合 1. pH对自由酶（游离酶）的影响 K1,K-1,K0是速度常数，K1e, K2e是平衡常数。 [EH][S] [EH][H+] [E-][H+] Ks= ,K1e= , K2e= [EHS] [EH2+] [EH] 接着以下面方式推出速度公式。 第七章 pH和T对酶促反应的影响 ?? 第七章 pH和T对酶促反应的影响 这里，Km=Ks(1+k2e/[H+]+[H+]/K1e) Km随pH变化而改变，这时Km为表观Km 当[S]》Km时，Km可不计,酶的V达最大 1.当pH》K2e,即pH低时， Vm[S] V=------------------------------------ Ks(1+k2e/[H+]+[H+]/K1e)+[s] Vm[S] 即V=--------------------------- Ks(1+[H+]/K1e)+[s] 第七章 pH和T对酶促反应的影响 为竞争性抑制，只改变Km, 不改变Vm. pKmapp=pKm-pK1+pH, pKmapp对pH作图， 得到一直线，斜率=+1 (线A) 第七章 pH和T对酶促反应的影响 Ｃ 2. [H+]低,即pH高时，pKmapp=pKm+pK2-pH pKmapp对pH作图，得一直线，斜率=-1( 线Ｂ） 第七章 pH和T对酶促反应的影响 B c 3. 如K1，K2相差较大，又接近中性pH，　　　　　 必定存在K2e ＜＜[H+]＜＜ K1e， K2 / [H+]和[H+] / K1接近0，Km=Ks, Km与pH无关，斜率=0（线Ｃ） 第七章 pH和T对酶促反应的影响 Ｃ 这样，正斜率1， 负斜率-1， 斜率0， 形成二交点，得pK1和pK2, 　　　最适pH=1/2(pK1+pK2). 第七章 pH和T对酶促反应的影响