[高等教育]第五章基因的重组2007.pptVIP

用CaCl2处理大肠杆菌，能增加膜的通透性。 3. 制备原理 该法是197年Mande和lHiga发现的，并且1972 Cohen 做实验进一步验证。 其转化效率为每微克质粒DNA可以获得5×106---2×107的转化菌落。 转化的可能原因为：在0℃的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀，同时Ca2+使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，诱导大肠杆菌形成感受态。 Ca2+能与加入的DNA分子结合，形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基——磷酸钙复合物，并粘附在细胞膜的外表面上，当42 ℃热击短暂处理细菌细胞时，细胞膜的液晶结构发生剧烈扰动，并随之出现许多间隙，为DNA分子提供进入细胞的通道。 4. 制备过程 培养大肠杆菌 OD600至0.3-0.4 On ice 5-10 min 4℃离心收集菌 用冰冷的60mMCaCl2重悬 4℃离心收集菌 4℃离心收集菌 分装、-70 ℃冻存 用冰冷的60mMCaCl2重悬 On ice 30 min 用冰冷的60mMCaCl2重悬 二、重组DNA导入大肠杆菌 （1）转化（transformation) 大肠杆菌捕获质粒DNA的过程。 （2）转染（transfection) 大肠杆菌捕获裸露的噬菌体DNA的过程。 1. 外源DNA导入细菌的几种方法 （3）转导（transduction) 借助噬