华根霉脂肪酶在黑曲霉中的重组表达研究-生物技术通报.PDFVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 3 :165-170 华根霉脂肪酶在黑曲霉中的重组表达研究 1 2 2 2 2 张谦  王剑英  林智  贾佳  郭宏涛 （1. 深圳技师学院，深圳 518116 ；2. 深圳市绿微康生物工程有限公司，深圳 518055） 摘 要 ： 将华根霉脂肪酶基因RCL 在黑曲霉中进行了重组表达。通过PCR 技术分别获得黑曲霉Pgpd 启动子和RCL-TtrpC 融合片段并克隆至质粒pCHAMBIA230，构建出RCL 超表达载体pCHAMBIA2302 ∷Pgpd-RCL-TtrpC。将该载体通过冻融法转化农 杆菌EHA105，进而通过农杆菌介导转化法转化黑曲霉，随机挑选7 株转化子，进行PCR 和Southern 杂交鉴定，均为阳性。对这 7 株转化子进行发酵和脂肪酶活力测定，结果显示，所有转化子均能表达RCL，其中T6 转化子的脂肪酶活力最高，达到71 U/mL。 SDS分析表明，重组表达的RCL 的分子量约为37 kD。 关键词 ： 重组表达 ；华根霉 ；脂肪酶 ；黑曲霉；根癌农杆菌 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.04.024 Recombinant Expression of Rhizopus chinensis Lipase in Aspergillus niger 1 2 2 2 2 Zhang Qian Wang Jianying Lin Zhi Jia Jia Guo Hongtao - （1.Shenzhen Institute Technology ，Shenzhen 518116 ；2 .Shenzhen Leveking Bio engineening Co. ，Ltd ，Shenzhen 518055 ） Abstract: This article carried out the recombinant expression of Rhizopus chinensis lipase（RCL）gene in Aspergillus niger . Promoter of Pgpd from A. niger and RCL-TtrpC fusing fragment were respectively obtained by PCR and further cloned to plasmid pCHAMBIA2302 to generate the RCL over-expression vector pCHAMBIA2302∷Pgpd-RCL-TtrpC. The resulting vector was introduced into Agrobacterium tumefaciens EHA105, and then transformed into A. niger through the mediation of A. tumefaciens . Seven randomly selected transformants were analyzed by PCR and Southern blot. As a r