32_酶的提取与分离纯化280一教材教学课件.pptVIP

单级萃取:使用一个混合器和一个分离器 3.2 双水相萃取技术（partion of two aqueous phase system） 又称水溶液两相分配技术 用两种不相溶的亲水性高分子聚合物水溶液，如聚乙二醇（PEG）和葡聚糖（Dextran）进行萃取。由于形成的两相均有很高的含水量（达70%?90%），故称“双水相”系统。 优点： 每一水相中均有很高的含水量，为酶等生物物质提供了一个良好的环境； PEG、Dextran和无机盐对酶等无毒害作用，不会引起变性。 ①双水相的形成： 两种不同水溶性聚合物浓度达到一定值时，体系会自然地分成互不相容的两相，构成双水相体系。 a 双节线 系线 b 双节线 均相区 均相区 两相区 两相区 系线 临界点 PEG/Dx和PEG/KPi系统的典型相图 几种典型的双水相系统 聚丙二醇 聚乙二醇、聚乙烯醇 葡聚糖（Dex）、羟丙基葡聚糖 聚乙二醇（PEG） 葡聚糖（Dex） 硫酸葡聚糖钠盐 聚丙烯乙二醇 羧基甲基葡聚糖钠盐 甲基纤维素 聚乙二醇（PEG） 磷酸钾、硫酸铵 硫酸钠、硫酸镁 ②萃取原理： 利用生物物质在双水相体系中的选择性分配。 ③应用 胞内酶的提取和精制: 除去细胞碎片，并使酶得到纯化。 几种典型的双水相萃取酶蛋白实例 酶 菌 种 相系统 延胡索酸酶 Brevibacterium sp. PEG/ 盐 天冬氨酸酶 E. coli PEG/ 盐 ?-半乳糖苷酶 E. coli PEG/ 盐 亮氨酸脱氢酶 Bacillus sp. PEG/Dex 乙醇脱氢酶 Baker’s yeast PEG/ 盐 青霉素酰化酶 E. coli PEG/ 盐 双水相萃取法的重要研究方向 --亲和萃取（亲和分配 ） 使用具有生物特异性的配基（ligand）来提高分离选择性。 蛋白质 配基 胰蛋白酶 胰蛋白酶抑制剂 磷酸果糖激酶 三嗪染料 甲酸脱氢酶 三嗪染料 葡糖-6-磷酸脱氢酶 三嗪染料 亲和萃取酶实例 3.3 超临界流体萃取 ●兼有蒸馏和溶液萃取的特征，与常规溶剂萃取的区别：将超临界流体作为萃取剂。 ●超临界流体(supercritical fluid，SCF）：超过气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。 ●临界点的概念可用临界温度和临界压力解释： 临界温度：高于此温度时，无论加压多大也不能使气体液化。 临界压力：在临界温度下，液化气体所需要的压力。 ● SCF性质介于液体和气体之间 ： SCF密度接近于液体，溶解度高。 SCF粘度和扩散系数接近于气体,传质扩散快。 ●基本过程： 在SCF中，溶解度大的物质溶于其中，与不溶解或溶解度小的物质分开。 降低压力，使SCF变为气态（密度降低），溶解物质能力下降，萃取物与溶剂分离。 ●常用超临界液态CO2作为萃取剂，因为： 液体CO2无毒 临界温度（304.06K）接近常温 临界压力（7.38MPa）较低 操作安全 超临界CO2萃取技术在生物、食品等工业中的应用 CO2萃取部分产品 原料名称 产物名称 原料名称 产物名称 小麦胚芽 胚芽油 豆子 豆油精炼油 啤酒花 啤酒花精油 茉莉花 净油 辣椒 辣椒红色素 菊花根 除虫菊酯 当归 精油 紫草 紫草宁 银杏叶 银杏内酯 花生 精炼油 3.4 反胶团萃取 ①反胶团：又称反胶束（Reversed Micelles） 指表面活性剂（由亲水的极性基团和疏水的非极性基团两部分组成）分散在连续有机溶剂中自发形成的一种稳定的纳米级的聚集体。 反胶团模型 亲水基团向内聚集 （正）胶束 反胶束 形成 表面活性剂溶于水，使其浓度超过临界胶束浓度。 表面活性剂溶于非极性溶剂，