(新药药理学)毒理学与新药研究.ppt

毒理学与新药研究 总论 急性毒性试验 长期毒性试验 遗传毒性试验 生殖毒性试验 致癌试验 特殊毒性试验 狭义的特殊毒性试验 遗传毒性试验 遗传毒理学 现代遗传学和毒理学的一个共同分支，是研究外源化学物及其他环境因素对生物体遗传机构的损害作用及其规律的一门科学 遗传毒性试验 通过直接检测原发性遗传学终点或检测导致某一终点的DNA损伤过程伴随的现象，来确定新药产生遗传物质损伤并导致遗传性改变的能力 基本概念 突变(mutation) 受环境因子作用，生物细胞发生的DNA损伤和各种遗传性改变。这种改变可以通过细胞或个体的传代而下传 突变的两种类型 基因突变（gene mutation）：又称点突变，指遗传物质DNA分子水平的突变。主要包括碱基置换和移码突变 染色体畸变（chromosome aberations）：指在细胞水平上遗传毒物引起的染色体损伤。主要包括染色体结构和数目异常 碱基置换和移码突变 染色体畸变 突变的不良后果 试验目的 判断在每种实验系统中诱发了突变的新药对人可能造成的遗传损伤 预测新药对哺乳动物的潜在致癌性 评价新药的遗传毒性 观察的效应终点类型 基因突变和染色体畸变的检测可直接反映化学毒物的致突变性，是评价化学毒物致突变性唯一可靠的方法。还有许多试验所观察到的现象并不反映基因突变、染色体畸变和染色体分离异常，而仅反映致突变过程中发生的其他事件。 因此，将试验观察到的现象所反映的各种事件统称为遗传学终点(genetic endpoint)。 观察项目的选择 国际环境致突变物致癌物防护委员会（ICPEMC）把遗传学终点分为5类： ①DNA完整性的改变(形成加合物，断裂，交联) ②DNA重排或交换 ③DNA碱基序列改变 ④染色体完整性改变 ⑤染色体分离改变 其中③实际上指基因突变，④指染色体畸变。 成套的观察项目 遗传毒理学评价程序通常为一组体内、外遗传毒理学试验。因为： 药物的种类和结构多种多样，其致突变的机制不尽相同 致突变物中仅少数具有直接致突变作用，大多数为间接致突变作用，即需要在体内代谢活化后，才具有致突变作用 药物的致突变性有强，也有弱；有的在某一检测系统中是强致突变物，而在另一系统中可能是弱的致突变物 关于遗传毒理学成套观察项目中那些试验可入选的原则有： ①选择的遗传毒性试验应包括5种类型的遗传学终点。 ②通常的实验材料有病毒、细菌、真菌、培养的哺乳细胞、植物、昆虫及哺乳动物等。 ③体内试验与体外试验配合。 ④应包括生殖细胞和体细胞。 通常，对于一种受试物应当先用原核细胞或体细胞的体外试验按遗传学终点合理配套进行试验，并对有阳性结果的遗传学终点验证其在体内的真实性，再行选用生殖细胞致突变试验进行遗传危害的评价。 常用的试验方法 我国2007年发布的《药物遗传毒性研究技术指导原则》推荐首选Ames试验、染色体畸变试验和微核试验 常用的致突变试验 (一)鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验) 常用的致突变试验 (二)染色体畸变试验 选用已建立的细胞系、细胞株或原代细胞培养物。在加或不加外源性代谢活化剂的情况下，将培养中的细胞接触新药后，用秋水仙素或秋水仙胺处理，是细胞停留在细胞分裂中期。收获细胞并制备染色体标本。标本经染色处理，可用于染色体畸变分析 畸变率5% 阴性（﹣） 畸变率5% 可疑（±） 畸变率10% 阳性（＋） 畸变率20% 阳性（＋＋） 畸变率50% 阳性（＋＋＋） 常用的致突变试验 (三)微核试验 微核(Micronucleus)的产生与染色体损伤有关，是细胞分裂后期仍遗留在细胞质内，末期之后被包含在子细胞质内的染色单体或染色体断片，或因纺锤体受损伤而丢失的完整染色体所演化成的一个或几个较主核小的规则的次核。 微核试验(Micronucleus test，MNT)是观察受试物能否产生微核的试验。其主要可检出DNA断裂剂和非整倍体诱变剂。 常用的致突变试验 (三)微核试验 性发育成熟的NIH小鼠 采集骨髓制备涂片 计算多染红细胞微核的数目 成红细胞 OECD推荐的体外遗传毒性试验 鼠伤寒沙门菌回复突变试验 大肠杆菌回复突变试验 哺乳动物体外细胞遗传学试验 哺乳动物细胞体外基因突变试验 哺乳动物细胞姊妹染色单体交换试验 啤酒酵母基因突变试验 啤酒酵母有丝分裂重组试验 哺乳动物细胞体外DNA损伤、修复和程序外DNA合成试验 OECD推荐的体内遗传毒性试验 微核试验 哺乳动物体内骨髓细胞遗传试验 啮齿动物显性致死试验 哺乳动物生殖细胞遗传学试验 小鼠斑点试验 小鼠可遗传易位试验 致癌试验 发展简况