细胞生物学实验实验一核酸的细胞化学.ppt

核酸的细胞化学 ——Feulgen反应 细胞化学——利用已知的化学反应，在保持细胞原有的形态结构上，以化学反应的方法显示出细胞中的化学成分，然后通过显微镜进行定性、定位和定量分析。 除了普通染色，光学显微镜基础上的细胞化学外，电镜细胞化学、荧光细胞化学、免疫细胞化学等现代细胞化学技术也得到广泛应用。 实验原理 DNA：单核苷酸聚合成的多核苷酸。 单核苷酸：磷酸、脱氧核糖（五碳糖）和碱基构成。 DNA经1M盐酸水解，嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基。 醛基与Schiff试剂反应形成紫红色的化合物。 结果：凡有DNA的地方，都能显示紫红色。 紫红色由醌基发色基团造成。 样品未经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到阴性结果，可证明Feulgen反应的专一性。 C N Feulgen反应式 1 2 3 4 5 实验仪器、材料 仪器、用具：显微镜、恒温水浴箱、温度计、解剖针、 酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。 材料：洋葱根尖、鳞茎 方法与步骤 亚硫酸水洗 3次每次1min 洋葱根尖或洋葱表皮 1M 盐酸60℃ 水解8～10 min 蒸馏水水洗 Schiff试剂 遮光染色30min 水洗5min 切取分生区 镊子捣碎 压片 镜检 注意：洋葱表皮省去捣碎和压片这一步，直接盖片观察 实验结果 洋葱鳞茎表皮细胞－Feulgen反应结果 对照片制作 方法一：将材料放在5%三氯醋酸中90℃15min，主要把DNA抽提掉，然后其它方法同上。 方法二：不经1M HCl水解，直接放在Schiff试剂中染色，然后按步骤?－⑨制片观察。 方法三：先经DNA酶消化，其它方法同上。 作 业 作业应包括的内容（实验目的、原理、方法步骤、结果分析、讨论） 结果分析：绘图示洋葱根尖细胞或鳞茎表皮细胞DNA的分布部位（图的各部分要标记清楚）。 讨论1：简述Feulgen反应的关键步骤。 讨论2：根据Feulgen反应结果以及对照实验结果展开分析讨论。 开放式创新性实验设计 目 的 意 义 通过开放式、创新性、研究型实验的过程，培养研究性学习和提高学习兴趣。 培养和提高实验的设计、文献查阅以及科学论文的写作能力。 培养科研的创新意识，团队协作精神。 培养和提高独立实验操作的能力以及发现问题、分析问题和解决问题的能力。 开 展 形 式 实验室全开放：实验室实行全方位开放（包括内容、时间、试剂和仪器设备）。 自选实验内容：要求尽可能在细胞生物学、遗传学学科范围内选定实验项目，内容尽可能具有创新性。 以小组形式（班内自由组合，每组5～6人）。 怎样选题和进行实验设计 1.兴趣性 在细胞生物学、遗传学的范围内可以根据自己学过的知识、发现的问题、疑点，以及观察到的自然现象、社会现象和日常生活中碰到的现象拟定出自己感兴趣的研究课题。 怎样选题和进行实验设计 2.科学性、新颖性 选题必须要有事实依据或理论基础 ，要有新颖性和独创性。确定题目后，可通过调查研究或通过图书馆、互联网查阅相关的文献资料，最后拟定出完整的设计方案。 怎样选题和进行实验设计 3.可行性 选题应结合主观和客观条件,应从自身的理论水平、信息资料、 实验设备、实验材料、成本 、研究周期等实际情况出发,充分考虑实现的可能性。 （1）研究的动态和进展。 （2）研究目的，研究的创新性点。 （3）实验采用的材料，需要的仪器设备、用品及药品试剂等。 （4）实验方法和步骤 （5）本实验预测的结果 设计实验方案应该包括的内容 实验设计注意的事项 1.实验材料原则上自行联系解决，如需购买，须经任课老师同意，并凭发票到实验室报销。 2.为确保人身和实验室安全，严禁在本实验室饲养小鼠、大鼠等动物。 3.不准在本实验室培养和使用高致病的微生物；不准在本实验室中使用放射性同位素。 实验时间安排 现在准备实验方案的设计工作，第七周前交1份方案纸质版，期末交修改过的电子版。 十一周开始实验（经老师同意，可提前进行），十四周前完成全部工作。 十五周前完成论文的写作、修改以及PPT。 十六周进行开放式研究性实验课堂讨论 。 作 业 要 求 十五周每组要交上一份打印好的研究论文及电子版。 每人写一份开放式研究型实验过程的总结或体会，字数1500左右（题目自定），纸质版和电子版十六周交。（ehui135@126.com or zhengll33@） 论文写作格式参照中山大学学报（自然科学版）。 教师信息 徐辉 ehui135@126.com 郑凌伶 zhengll33@