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The 3rd Affiliated Hospital Of Southern Med. Univ. 染色体的常用检测方法 林凯桑 传统细胞遗传学技术 染色体的显带技术 快速染色体异常检测( RAD) 技术 荧光原位杂交技术(FISH) 分子核型技术 比较基因组杂交技术(CGH) 微阵列-比较基因组杂交技术（α-CGH） 基本概念 核型（karyotype）： 一个体细胞（somatic cell）中的全部染色体称为核型。确切的说核型是指是一个体细胞内的全部染色体按其大小和形态特征排列所构成的图像。 对这种图像进行分析称为核型分析。 在细胞周期的有丝分裂中期，染色体的形态结构比较稳定，一般所描述的染色体的形态结构都是中期染色体。 染色体的正常核型 丹佛 (Denver) 体制 1960年人类染色体研究者在美国丹佛市聚会制定的人类有丝分裂染色体标准命名系统。 规定每一条染色体可通过相对长度、臂率和着丝粒指数三个参数予以识别。 常染色体按长度递减的次序以1～22号编号，性染色体则称为X和Y。另外人类的46条染色体根据长度递减顺序和着丝粒位置划分为7个易区分的组，即以字母A～G表示7组染色体，并决定将副缢痕和随体作为识别染色体的辅助指标。 染色体显带 对有丝分裂中期染色体进行酶解，酸、碱、盐等处理，并用特殊的染色方法可使染色体在其长轴上显出一个个明暗交替或染色深浅不同的横纹，这样的横纹就叫做染色体的带。 分类: 整条染色体的显带技术 染色体局部的显带技术 染色体显带核型 染色体显带 Q带：荧光染料 氮芥喹吖因(QM) G带：胰酶＋Giemsa R带：经处理的标本＋Giemsa or Acridine Orange G带的反带 C带：Y染色体 着丝粒 副缢痕 T带：染色体末端结构异常 N带：AgNO3＋Giemsa, 随体和NOR 1.Q带（Q banding）： Q显带用芥子喹吖因（QM）或盐酸喹吖因（QH）等荧光染料对染色体标本进行染色，然后在荧光显微镜下进行观察。 但Q带保存时间短，而且需要在荧光显微镜下进行观察，因而，限制了Q显带技术的应用。 人类1号染色体Q、G、R三种显带对比图 专门显示着丝粒的显带技术。C显带也可使第1、9、16号和Y染色体长臂的异染色质区染色。因而，C带可用来分析染色体这些部位的改变。 4.C显带（C banding）： C显带核型 5. T显带（T banding）： 专门显示染色体端粒的显带技术，用来分析染色体端粒。 6. N显带（N banding）： 专门显示核仁组织区的显带技术。 7. 高分辨显带 对染色体的分析达到了亚带（subband）的水平，能够确认那些更为微小的染色体结构改变。 几种显带的制作方法之间的关系 染色体显带技术的优缺点 染色体显带是细胞遗传学分析技术中不可替代的基本方法。“金标准” 操作简便，经济 可以提供核型的完整图像 影响因素： 染色体相似性很强，复杂畸变时；或畸变微小（如缺失5Mb)，不足以引起图像明显变化时，结果分析困难。 耗时（培养需72小时）且依赖于获得良好的分裂相，而有的标本中分裂指数低，或染色体形态学表型差。 传统细胞遗传学技术 染色体的显带技术 快速染色体异常检测( RAD) 技术 荧光原位杂交技术(FISH) 分子核型技术 比较基因组杂交技术(CGH) 微阵列-比较基因组杂交技术（α-CGH） 原位杂交 是用已标记的核酸探针与组织切片或细胞中的待测核酸中的互补序列杂交,从而对组织细胞中的核酸进行定性、定位和相对定量分析。 原位杂交 1）同位素原位杂交——70年代 2）非同位素原位杂交——80年代中后期 免疫酶联 荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization, FISH) 同位素原位杂交的不足： 1）不稳定；2）高背景；3）曝光时间长；4）结果统计学处理繁琐；5）同位素的使用和处理 荧光原位杂交技术(FISH) 1986年Pankel在原位杂交基础上，将放射性同位素标记改用非放射性同位素即荧光素标记探针而建立了技术。利用该技术，可以精确地把一DNA片段定位到某条染色体的特定区带上。 FISH检测不需要进行细胞培养，是临床遗传学检测的有效补充手段。 原理：通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况。