高速离心实验方案.docVIP

实验方案 实验目的：采用高速离心法分离纯化荞麦总黄酮 实验原理: a.离心力(centrifugal force，Fc）离心作用是根据一定角速度下作圆周运动的物体都受到一个向外的离心力进行的。离心力(Fc)的大小等于离心加速度ω2X与颗粒质量m的乘积，即： Fc=mω2X 其中ω是旋转角速度，以弧度/秒为单位；X是颗粒离开旋转中心的距离，以cm为单位；m是质量，以克为单位。 b.相对离心力（RCF）由于各种离心机转子的半径或者离心管至旋转轴中心的距离不同，离心力也随之变化，因此在文献中常用“相对离心力”或“数字×g”表示离心力，只要RCF值不变，一个样品可以在不同的离心机上获得相同的结果。RCF就是实际离心场转化为重力加速度的倍数。 RCF=1.118×10-5·n2·R 式中R为离心转子的半径距离，以cm为单位；n为转子每分钟的转数（rpm）。 仪器与试药 TU-1901型双光束紫外可见分光光度计；KQ-100型超声仪；HITACHI 80P-7超速离心机（半径为7.7cm）；Biofage 15R超低温高速离心机；752型紫外-可见分光光度计。芦丁对照品,苦荞原料；乙醇（医用酒精≥95%）。 方法与结果 （一）样品制备 准确称取160g苦荞种子，以10倍量60%乙醇为提取溶剂，提取次数为3次，每次2小时。将药液浓缩至药液比约为1:5（此药液浓缩为850ml），药液密度为1.004，离心，取其沉淀作为其纯化产物。考察分离因数、离心时间两个因素，每个考察因素有五个梯度，分别在每个梯度做三个平行值，取其平均值，每一个平行值精密量取25ml浓缩液，相当于生药量4.706g。 （二）含量测定方法 精密称取所得浸膏细粉0.0500g，置于具塞瓶中，精密吸取60%乙醇50ml，称重,超声溶解，补足重量后滤过，取续滤液0.3ml,置于10ml容量瓶中，加AlCl3溶液2ml,KAc溶液3ml,用60%乙醇定容，显色30min后,用紫外分光光度计在418nm处测其吸光度值。根据标准曲线计算可得提取物总黄酮量及其含量 （三）统计学方法 实验数据采用SPSS10.0统计软件进行方差分析。 4.1分离因数α（离心转速） 分离因数α，即离心机的转速，是衡量离心力大小的重要技术参数，从而成为影响离心机分离效果的主要因素。分离因数的大小不仅直接关系到除杂程度的好坏，同时也影响到药液中主要成分的含量。有数据显示离心转速增加，分离除杂效果增强，但对于药液中主要成分的含量却有不同程度的影响。 实验规定离心时间为20min，离心温度为25℃，药液比为1:4～1:6，密度约为1.004～1.008（15℃）时，以离心沉淀为纯化产物，分别考察5000r/min、7000r/min、9000r/min、11000r/min、13000r/min五个不同离心因数对纯化效果的影响，其相对离心力分别为2152.2g/min、4218.2 g/min、6973.0 g/min、10416.4 g/min、14578.5 g/min，以得膏率、总黄酮量、总黄酮含量为指标，结合有效成分保留率进行综合评价 4.2分离时间 在离心过程中离心时间并非越长越好，因为随着离心时间的增长，沉淀结合会更加紧密，从而使沉淀所包裹和吸附的有效成分增多，但有效成份总量不变，一定时间内有效成份增加并不明显，一味延长离心时间反而会使生产成本增加；离心时间太短，沉降不充分，也同样达不到分离除杂的效果。 实验规定分离因数为9000r/min,即相对离心力为6973.0g/min时，离心温度为25℃，药液比为1:4～1:6，其密度约为1.004～1.008（15℃）的条件时，以沉淀为纯化产物，分别考察15min、25min、35min、45min、55min五个不同离心时间对提取效果的影响，以得膏率、总黄酮量、总黄酮含量为指标，结合有效成分保留率进行综合评价 4.3离心温度 高速离心机在快速旋转时会产生一定的热量而对药液中某些物质会有不同程度的影响。特别是对于含有机溶媒的药液，如酒剂、酊剂等提取液，离心机产生的热能使温度升高，引起乙醇挥发，含醇量随之降低，药液中某些醇溶性成分便随之析出。 实验采用Biofage 15R超低温高速离心机（德国Aeraeus公司）考察离心时间为20min时，离心温度为4℃条件下，药液比为1:4～1:6，密度约为1.004～1.008（15℃）时，分别考察不同转速对总黄酮及其含量的影响 4.4药液密度的影响 药液密度大小是影响分离、除杂的因素之一[29]，20℃时控制其密度在1.08～1.10之间比较适宜。若密度太大，药液比较黏稠，使分离效果不甚理想，若药液密度过小，因药液量多，需要延长工作时间，则会增加生产成本。 准确称取30.00g苦荞共三份，在分