《植物组织培养》课件PPT第2章培养基及其配制.pptVIP

第二章 培养基及其配制 目的要求： 1、了解几种常用培养基的特点； 2、掌握培养基的主要成分及其作用； 3、掌握培养基的配制方法。 培养基(culture medium) ： ---是植物组织培养的重要基质。(土壤+自养条件） ---不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。 因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。 一、培养基的种类 最早的培养基: 是Sacks(1680)和Knop(1681)，根据植物从土中主要是吸收无机盐营养，设计出了由无机盐组成的Sacks和Knop溶液. 常用的培养基及特点如下： (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸盐含量较其他培养基为高；应用广泛—基本培养基 。 (2) B5培养基 1968年，Gamborg等，培养大豆根细胞。 特点：含有较低的铵，对有些植物的生长有抑制作用；适宜于双子叶植物特别是木本植物。 (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。 （4）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培养。 特点：成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。 (5) KM—8P培养基 1974年，原生质体培养。 特点：有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。 二、培养基的成分 水、无机盐、有机物、天然复合物、 植物激素、培养体的支持材料、抗生素、 活性炭等。 （一）水 是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。 配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。 （二）无机元素(inorganic element) 大量元素： 指浓度大于0.5mmol／L的元素等。其作用是： (1)N 是细胞质、细胞核、生物膜等的组成成分，是生命不可缺少的物质。 供应形式：NO3—N、NH4—N。NH4—N对植物生长较为有利。 供应物质：KNO3、NH4NO3、 K2SO4、氨基酸等。 (2)P 是磷脂的主要成分。参与生物膜、核酸、ATP、ADP等的组成。 供应形式：磷酸二氢根、磷酸氢根 供应物质：KH2P04或NaH2P04等。 在植物组织培养过程中，向培养基内添加磷，不仅增加养分、提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。 (3)K 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。 (4)Mg、S和Ca Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用。 微量元素 指小于0.5mmol／L的元素，Fe，B，Mn，Zn、Cu，Mo，Co等。 铁-是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分；是叶绿素形成的必要条件。对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。 供应物：鳌合铁（ FeSO4·7H20+Na2—EDTA）在制做培养基时不用Fe2（SO4）3，和FeCl3(因其在pH值5．2以上，易形成Fe(OH)3的不溶性沉淀)。 B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等：也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。 （三）有机化合物(organic compound) 培养基中若只含有大量元素与微量元素，常称为基本培养基（basic medium)。为不同的培养目的往往要加入一些有机物以利于快速生长。常加入的有机成分主要有以下几类： 碳水化合物 最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳源。麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖在组织培养中也有应用。 ——蔗糖使用浓度在2%—5%，常用3%，即配制一升培养基称取30g蔗糖。