CN106950380-CN201710120659-一种胃癌监测试剂盒及其使用方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 106950380 A (43)申请公布日 2017.07.14 (21)申请号 201710120659.4 (22)申请日 2017.03.02 (71)申请人 先思达（南京）生物科技有限公司 地址 210046 江苏省南京市栖霞区尧化街 道甘家边东108号4幢 申请人 江苏先思达生物科技有限公司　 常州吉泰生物科技有限公司 (72)发明人 陈翠英　 (74)专利代理机构 北京德崇智捷知识产权代理 有限公司 11467 代理人 王金双 (51)Int.Cl. G01N 33/68(2006.01) 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 (54)发明名称 一种胃癌监测试剂盒及其使用方法 (57)摘要 本发明提供了一种胃癌监测试剂盒及其使 用方法，该试剂盒包括：试剂A：浓度为10mM的碳 酸氢铵溶液中加入5%的SDS配制而成；试剂B：浓 度为10% NP40中加入不少于2.4单位/μL 糖苷 外切酶配制而成；试剂C：等体积20mM APTS的 1.2M 柠檬酸和 2M 有机物还原剂的DMSO的混合 液；试剂D：0.5μL浓度为100mM、pH 5.6的NH AC， 4 0.2μL的唾液酸酶，2.50μL双氧水。该试剂盒基 于检测血液糖蛋白中寡糖链的指纹图谱作为诊 断指标对胃癌患者进行了评估，以诊断胃癌的肿 瘤分期。 A 0 8 3 0 5 9 6 0 1 N C CN 106950380 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种胃癌监测试剂盒，其特征在于：由以下试剂组成： 试剂A：浓度为10mM的碳酸氢铵溶液中加入质量浓度5%的SDS配制而成； 试剂B：质量浓度为10% NP40中加入不少于2.4单位/μL 糖苷外切酶配制而成； 试剂C：等体积20mM APTS的1.2M 柠檬酸和 2M有机物还原剂的DMSO的混合液； 试剂D：0.5μL浓度为100mM、pH 5.6的NHAC，不少于0.2μL的唾液酸酶，2.50μL双氧水。 4 2.根据权利要求1所述的肺癌监测试剂盒，其特征在于：所述有机物还原剂为NaCNBH 。 3 3.权利要求1所述的胃癌监测试剂盒的使用方法，其特征在于：包括以下步骤： 步骤1，往稀释一倍的3μL血清加入3μL的试剂A，进行变性反应，加入3μL试剂 B，37℃反 应4小时后干燥，得到样品； 步骤2，在所得样品中加入4μL试剂C，进行荧光标记，然后加入150μL水终止标记反应， 得到荧光标记后的样品； 步骤3，将3μL试剂D加至5μL荧光标记后的样品，进行去末端唾液酸反应，加入100μL的 水终止标记反应，得到去末端唾液酸反应的样品； 步骤4，取8μL去末端唾液酸反应的样品，用ABI测序仪进行寡糖链片分离，得到图谱。 4.根据权利要求3所述的胃癌监测试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤1变性反应的 条件为不低于95℃加热。 5.根据权利要求3所述的胃癌监测试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤2中荧光标记 的条件为60-70℃加热。 6.根据权利要求3所述的胃癌监测试剂盒