生物化学3(蛋白质-2-理化性质)-2011-10.pptVIP

第六节 蛋白质的性质 1.蛋白质的两性解离和等电点： 2.蛋白质的胶体性质： 3.蛋白质的沉淀反应： 4.蛋白质的变性： 5.蛋白质的颜色反应： 6.蛋白质的紫外吸收 1.蛋白质两性解离性质和等电点 意义： 不同的蛋白质具有特定的等电点，其决定因素为构成蛋白质的AA种类和数量 蛋白质在等电点时溶解度最小，利用此来分离沉淀蛋白质 电泳: 定义：大分子化合物在电场中移动的现象称为电泳 电泳速度的决定因素 内部因素：分子带电荷数；颗粒大小、形状等 外部因素：电场强度；溶液pH值；载体种类等 可以利用电泳分离蛋白质 2.蛋白质的胶体性质： 由于蛋白质的分子量很大（1-100nm），它在水中能够形成胶体溶液。蛋白质溶液具有胶体溶液的典型性质，如丁达尔现象、布郎运动等。 由于胶体溶液中的蛋白质不能通过半透膜，因此可以应用透析法将非蛋白的小分子杂质除去。 透析法：以半透膜提纯蛋白质的方法叫透析法 半透膜：只允许溶剂小分子通过，而溶质大分子不能通过，如羊皮纸、火棉胶、玻璃纸等 3.蛋白质的沉淀反应： 定义： 蛋白质在溶液中靠水膜和电荷保持其稳定性，水膜和电荷一旦除去，蛋白质溶液的稳定性就被破坏，蛋白质就会从溶液中沉淀下来，此现象即为蛋白质的沉淀作用。 分类; 3.1 可逆沉淀反应 3.2 不可逆沉淀反应 3.1 可逆沉淀反应 定义：沉淀过程中，蛋白质结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为非变性沉淀 沉淀条件：温和，改变溶液的pH或电荷状况 意义：可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法 分类：等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等 等电点沉淀法 盐析法： 定义：加高浓度的盐使蛋白质沉淀析出的现象 中性盐（NH4）2SO4，Na2SO4，NaCl等 机理：蛋白质脱去水化层；中和分子电荷 优点：不引起蛋白质变性 盐溶：低浓度的中性盐可以增加蛋白质的溶解度的现象 机理：盐与蛋白质分子结合，增加蛋白质带电荷数 有机溶剂沉淀法： 定义：加入甲醇，乙醇，丙酮等使Pr沉淀析出 机理：脱去水化层以及降低介电常数而增加带电质点间的相互作用 条件：低温和快速，可以防止蛋白质变性 3.2 不可逆沉淀反应 定义： 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水，所以又称为变性沉淀 沉淀条件： 强烈，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质 种类： 加热沉淀；强酸碱沉淀；重金属盐沉淀（Hg2+、 Pb2+ 、Cu2+、 Ag2+）；生物碱试剂或某些酸类沉淀等 加热变性沉淀（加入少量盐效果更好） 机理：加热变性使蛋白质天然结构解体，疏水基外露，损坏了水化层； 用途：制豆腐（加热+少量盐卤） 重金属盐沉淀法 机理：当溶液pHpI,蛋白质颗粒带负电荷,易与重金属离子(Hg2+,Pb2+,Cu2+.Ag+等)生成不溶性沉淀 用途：抢救误服重金属盐的病人 某些酸沉淀： 加入苦味酸、柠檬酸、单宁酸、磺基水杨酸、三氯酯酸等，可以与蛋白质化合成不溶性盐类而沉淀 4.蛋白质的变性： 4.1 定义： 天然蛋白质因受物理、化学因素的影响，使蛋白质分子的构象发生了异常变化，从而导致生物活性的丧失以及物理、化学性质的异常变化。这种现象称为蛋白质的变性(denaturation) 4.2 蛋白质变性后的表现： 生物活性丧失； 溶解度降低，对于球状蛋白粘度增加； 生化反应易进行； 光吸收系数增大； 组分和分子量不变 温度（热、冷） 强酸、强碱 尿素和盐酸胍的影响（破坏分子内部氢键、破坏疏水效应) 表面活性剂的影响：如十二烷基硫酸钠（SDS） 4.4 变性种类 可逆变性作用：变性后的蛋白质除去变性因素后，可恢复或部分恢复原有的理化性质及生物活性 例如：血红蛋白分子加酸变性后，加碱中和可恢复活性的2/3 不可逆变性作用：变性后，即使除去变性因素，蛋白质天然性质和生物活性仍得不到恢复 例如:鸡蛋热变性后无法将其逆转 4.5 蛋白质的复性 定义： 当变性因素除去后，变性蛋白质又可恢复到天然构象，这一现象称为蛋白质的复性（renaturation）。 5.蛋白质的颜色反应： 5.1 双缩脲反应； 5.2 米伦氏反应； 5.3 乙醛酸反应； 5.4 坂口反应； 5.5 黄色反应； 5.1双缩脲反应 5.2 米伦氏反应 米伦试剂： 硝酸汞（HgNO3）、亚硝酸汞（HgNO2）、硝酸（HNO3）、 亚硝酸（HNO2）混合物 米伦氏反应： 酚类化合物+米伦试剂 白色沉淀 红色沉淀 意义： 含有酪氨酸（Tyr）的蛋白质（酪氨酸含酚基）可发生该反应 5.3 乙醛酸反应 反应： 含吲哚基的化合物+乙醛酸+沿试管壁缓慢加入浓硫酸 两层间出现紫色环