(精选)【抗生素精品课件】D－氨基酸氧化酶基因工程菌诱导发酵实验教学课件.pptVIP

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2018-03-21 发布于天津
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(精选)【抗生素精品课件】D－氨基酸氧化酶基因工程菌诱导发酵实验教学课件.ppt

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D－氨基酸氧化酶基因工程菌诱导发酵实验一、选题的意义两步酶法合成7-ACA的研究两步酶法合成7-ACA，是指头孢菌素C（CPC）首先在DAO的催化下氧化脱羧反应生成戊二酰-7ACA(GL-7ACA)，GL-7ACA再由GA催化，脱酰基生成7-ACA。整个过程的流程参见Fig.1。因此，两步酶法转化CPC合成7-ACA的研究，离不开对DAO和GA的研究。 Fig.1 Enzymetic conversion of cephalosporsion CPC to 7-ACA 半合成头孢类抗生素，是类高效、广谱性抗生素，被广泛应用于治疗细菌感染。具资料统计，以青霉素和头孢菌素为代表的Beta-内酰胺类抗生素，销售额已占临床抗生素世界销售总额的70%左右，前者占20%，后者占52%。由于在世界范围内，对半合成头孢菌素类抗生素的广泛需求，致使医药市场上对合成头孢类抗生素的前体——7-氨基头孢烷酸（7-ACA）的需求量持续增长。意义 D－氨基酸氧化酶的研究进展 DAO是一种黄素腺嘌呤二核苷酸为辅基典型的黄素蛋白酶，它是由两个相同的亚基与一分子FAD螯合在一起形成的有功能的蛋白质。 DAO作用于CPC的7位D型a-氨基己二酰側链，催化CPC氧化脱氨形成过氧化氢和a-酮基己二酰-7ACA，AKA-7ACA再被过氧化氢氧化脱羧生成GL-7ACA。次后，由于GA的发现，应用该酶可将GL-7ACA进一步酶促水解而得到7-ACA，DAO是这些反应的第一个酶，它在工业生产中的重要性进一步被认识。 DAO基因的表达的研究 DAO在大肠杆菌中表达，需IPTG或乳糖诱导，胞内表达。优点是发酵周期短 18－20h。在毕赤酵母表达DAO，组成型的分泌表达。避免过氧化氢酶的影响。 Fig3.Expression of dao gene in E.coli induced with IPTG Lane1,2 The precipitation of 6-His-N ; Lane3, The precipitation of 2-His-N ; Lane4, The precipitation of 6-His-C ; Lane 5 The supernatantof 6-His-N ; Lane 6The supernatantof 2-His-N ; Lane 7 The supernatantof 6-His-C ; * * * *