(精选)【医学课件】蛋白质含量测定教学课件.pptVIP

蛋白质含量测定; 目前测定蛋白质含量的方法有很多种，下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法： 物理性质：紫外分光光度法。 化学性质：凯氏定氮法、双缩脲法、Lowry法等。 染色性质：考马斯亮蓝染色法、银染法。 其他性质：荧光法。;蛋白质含量测定——双缩脲法;【实验原理】 利用半饱和硫酸铵或27.8％硫酸钠-亚硫酸钠可使血清球蛋白沉淀下来，而此时血清白蛋白仍处于溶解状态，因此可把两者分开，这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法称为盐析法。盐析分离蛋白质的方法不仅用于临床医学，而且还广泛地用于生物化学研究工作中，如一些特殊蛋白质-酶、蛋白激素等的分离和纯化。 ; 蛋白质和双缩脲一样，在碱性溶液中能与铜离子形成紫色络合物（双缩脲反应），且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。 ; 但必须注意，此反应并非蛋白质所特有，凡分子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内有H2N—CH＝NH -CH2-NH2等结构化合物，双缩脲反应也呈阳性。 本实验用27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液稀释血清，取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量，剩余部分则用滤纸过滤，使析出的球蛋白与白蛋白分离，取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白之比即所谓的白/球比值。; 【实验材料】 1．分光光度计 2．试剂 （1）27.8％硫酸钠-亚硫酸钠溶液 （2）双缩脲试剂： （3）标准血清： ;【实验方法】 1．取中试管4支，分别标以1、 2 、3、 4，吸取27.8％硫酸钠-亚硫酸钠1 ml，置1管中备用。 2．吸取血清0.2 ml于另一试管中，加27.8％硫酸钠-亚硫酸钠4.8 ml，用拇指压住管口倒转混合5～6次，放置约15 s，用1 ml刻度吸管吸取1 ml置于管4中（总蛋白测定管）。 3．将剩余的血清混悬液过滤（如滤液不清，可重复过滤，直至澄清为止），用另一支1 ml刻度吸管取此液1 ml，置于管3（白蛋白测定管）。 4．另用一支1 ml刻度吸管吸取标准血清1 ml，置管2中（标准管）。 5．于上述4支试??中分别加入双缩脲试剂4 ml，混匀。 6．在室温下放置10 min后，以管1（空白管）调零，在540 nm的波长下进行比色，分别记录2、 3、 4管的吸光度读数。