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化学药剂对微生物的影响 一些化学药剂对微生物生长有抑制或杀死作用,因此在实验室中及生产上常利用某些化学药剂进行灭菌或消毒。 1. 每组取无菌培养皿两付,在皿底注明处理方法及菌种名称。 2.取枯草杆菌和金黄色葡萄球菌0.2mL放入相应的培养皿中. 将已熔化冷却至500C左右的细菌培养基分别倒入上述培养皿中,混匀后凝固成平板。 用镊子将分别滴有两滴0.1%HgCl2,2.5%碘酒,75%酒精,5%石炭酸的小圆形滤纸片,放于每一平板上,盖上皿盖,于28~300C的温箱中培养48h后记录结果。 如果有抑制作用,则滤纸片四周出现无菌生长的抑菌圈,圈的大小可表示消毒剂抑菌的强弱(见图-2)。 化学药剂对微生物的影响 抗生素对微生物的影响 抗生素的定义:某些微生物,特别是放线菌,在生命活动过程中产生了一些对其本身无害而能抑制或杀死另外一些微生物的特异性的代谢产物,这些特异性的代谢产物称为抗生素。产生抗生素的微生物称为抗生菌。 抗生素在极低浓度下即能抑制或杀死某些微生物。在抗生菌的筛选中,常以其对某些微生物产生的拮抗作用所形成的抑菌圈大小来衡量抗生菌作用的强弱和抗生素的有效浓度 A. 加生理盐水? B. 涂成薄膜 C. 固定菌体 细菌涂片制备过程 革兰氏染色的过程– 制片 革兰氏染色的过程– 染色 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 革兰氏染色注意载玻片要洁净,滴无菌水和取菌不宜过多,涂片要均匀,不宜过厚;热固定温度不宜过高,(以玻片背面不烫手为宜),否则会改变甚至破坏细胞形态;水洗时不要直接冲洗涂面,而应使水从载玻片的一端流下,水流不宜过急,过大,以免涂片薄层脱落。 革兰氏染色结果是否正确,乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节,脱色不足,阴性菌被误染成阳性菌,脱色过度,阳性菌被误染为阴性菌。 美蓝染色注意染液不宜过多或过少,否则在盖上盖玻片的时,菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察;同样,盖玻片的不宜平着放下,以免产生气泡影响观察。 霉菌直接制片注意挑菌和制片时要小心,尽可能保持霉菌的自然生长状态,加盖玻片时勿压入气泡,以免影响观察。 注意事项 实验报告 1.绘图说明经革兰氏染色后大肠肝菌和金黄色葡萄球菌的染色结果。 实验报告 思考题: 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性?其中最关键的环节是什么? 你的染色结果是否正确?如果不正确,请说明原因。 进行革兰氏染色时,为什么特别强调菌龄不能太老,用老龄细菌染色出现什么问题? 革兰氏染色时,初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色?你认为革兰氏染色中,哪一个步骤可以省去而不影响最终结果?在什么情况下可以采用? 实验四 细菌分离培养 实验材料 实验程序 目的要求 实验报告 目的要求 了解培养基制备过程及常用培养基的种类 学会细菌的接种方法及无菌操作法 学会微生物的分布情况,建立无菌观念 了解常用消毒灭菌方法并验证其杀菌作用 了解药敏试验的操作方法 实验用品 小试管 高压灭菌器 培养皿 营养 吸管 半固体 三角玻扒 蛋白胨水 烧杯 天平 量筒 玻璃吸管 玻棒 标签贴纸 药匙 铁丝 剪刀 电炉 实验程序 (一)培养基的配制 同学们先将试管贴好标签。注明培养基名称,组别, 日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。 注意:标签用铅笔书写,以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。 操作图示: 培养基配方: 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 蒸馏水 固体培养基:加2-3%的琼脂 半固体培养基:0.2-0.3%琼脂 配制肉汤斜面培养基50 mL 将小烧杯置天平上,用药匙取营养肉汤干燥培养基,称取1 g先加少量蒸馏水,溶解彻底再转移到量筒,定容至50ml,然后倒在250 mL烧杯里,加入琼脂1g(2%),浸泡于液体培养基里,液面位置做好标记,在电炉上加热融化后(注意补充蒸发的水分以保持原体积不变),用分液漏斗分装6支小试管,每支5 mL左右(约试管高度的1/5左右), 用硅
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