(精编)【医学精品课件之抗生素】微生物发酵技术教学课件.pptVIP

第十二章 微生物发酵技术; 发酵工程是一门具有悠久历史，又融合了现代科学的技术，是现代生物技术的组成部分。本章主要介绍发酵工程的基本内容和基本原理，重点介绍了工业发酵的工艺流程,还介绍了典型产品的发酵生产工艺，如青霉素，谷氨酸和维生素C的生产。 ;第一节 微生物发酵概论;1.微生物菌体发酵 是以获得具有某种用途的菌体为目的的发酵。用于面包制作的酵母发酵及用于人类或动物食品的微生物菌体蛋白发酵是比较传统的菌体发酵工业。新的菌体发酵可用来生产药用真菌，如香菇菌、依赖虫蛹而生存的冬虫夏草菌、与天麻共存的密环菌等药用菌。 2.微生物酶发酵 酶普遍存在于动物、植物和微生物中。因为微生物种类多、产酶的品种多、生产容易和成本低等特点，所以目前工业应用的酶大多来自微生物发酵。 3.微生物代谢产物发酵 微生物代谢产物很多。在菌体对数生长期所产生的产物，如氨基酸、核苷酸、蛋白质和糖类等是菌体生长繁殖所必需的，这些产物叫做初级代谢产物。在菌体生长静止期，某些菌体能合成一些具有特定功能的产物，如抗生素、生物碱、植物生长因子等。这些产物与菌体生长繁殖无明显关系，叫做次级代谢产物。 ;第二节 工业发酵的工艺流程;在大规模的发酵生产中，需要将选育出的优良菌种经过多次扩大培养，让它们达到一定数量以后，再进行接种。;发酵过程一般是在发酵罐内进行的，发酵罐是一种圆柱形的容器，容量从几升到几百万升，罐上除有通气、搅拌、接种、加料、冷却等装置外，还有对温度、pH、通气量与转速等发酵条件进行检测和控制的装置。 发酵过程中环境条件的变化，不仅会影响菌种的生长繁殖，而且会影响菌种代谢产物的形成。为了使发酵过程能顺利进行，要随时取样，检测培养液中的细菌数目、产物浓度，同时还要及时为发酵菌提供必需的营养，并严格控制温度、pH、溶氧、通气量与转速等发酵条件。　;发酵结束后，要对发酵液或生物细胞进行分离和提取精制，将发酵产物制成合乎要求的产品。对发酵产品的要求不同，分离提纯的方法也相应有些区别。利用发酵工程生产的产品有菌种代谢产物和菌种本身（???酵母菌和细菌）两大类，如果产品是菌种，分离方法一般是通过过滤、沉淀从培养液中分离出；如果产品是代谢产物，则采用蒸馏、萃取、离子交换等方法提取。分离提纯后的产品，还要经过质量检查合格后，才能成为正式产品。 ;工艺流程;第三节 工业发酵的主要产品; (一)青霉素发酵生产菌株 最初由弗莱明分离的点青霉，只能产生2 U／ml的青霉素。目前全世界用于生产青霉素的高产菌株，大都由菌株Wis Q l76(一种产黄青霉)经不同改良途径得到。70年代前育种采用诱变和随机筛选方法，后来由于原生质体融合技术、基因克隆技术等现代育种技术的应用，青霉素工业发酵生产水平已达85 000U／ml以上。青霉素生产菌株一般在真空冷冻干燥状态下保存其分生孢子，也可以用甘油或乳糖溶剂作悬浮剂，在－70度冰箱或液氮中保存孢子悬浮液和营养菌丝体。;(二)青霉素发酵生产培养基 1、碳源　目前普遍采用淀粉经酶水解的葡萄糖糖化液进行流加。 2、氮源　可选用玉米浆、花生饼粉、精制棉籽饼粉或麸质粉，并补加无机氮源。 3、前体　苯乙酸或苯乙酰胺，由于它们对青霉菌有一定毒性，故一次加入量不能大于0．1％，并采用多次加入方式。 4、无机盐 包括硫、磷、钙、镁、钾等盐类，铁离子对青霉菌有毒害作用，应严格控制发酵波中铁含量在30ug／ml以下。;(三)青霉素发酵工艺 1.种子制备 种子制备阶段以生产丰富的孢子（斜面和大米孢子培养）或大量健壮的菌丝体（种子罐）为目的。 2.发酵培养 影响青霉素发酵产率的因素有环境因素，如pH值、温度、溶氧饱合度、碳氮组份含量等；有生理变量因素，包括菌丝浓度、菌丝生长速度、菌丝形态等，对它们都要进行严格控制。 3.发酵后处理 (1)过滤：采用鼓式真空过滤器，过滤前加去乳化剂并降温 (2)提炼用溶媒萃取法。将发酵滤液酸化至pH 2，加1/3体积的醋酸丁酯，混合后以碟片式离心机分离，得一次BA提取液。然后以1.3 % ～ 1.9 %NaHCO3在pH 6.8 ～ 7.1条件下将青霉素从BA中提取到缓冲液中。再调pH至2.0，将青霉素从缓冲液再次转入到BA中，方法同上，二次BA提取液。;(3)脱色 在二次B A提取液中加活性炭150 一300g／10亿单位，脱色、过滤。 (4)结晶 用丁醇共沸结晶法。将二次BA萃取以0.5 mol/L NaOH 液萃取，调pH至6.4 ～ 6.8，得青霉素钠盐水浓缩液。加3～4倍体积的丁醇，在16～26℃，5～10 mmHg下真空蒸馏，将水与丁醇共沸物蒸出，并随时补加丁醇。当浓缩到原来水浓缩体积，蒸出馏分中含水达2％ ～ 4 ％时，即停止蒸馏。