起始识别复合物1基因在血管平滑肌细胞DNA复制中的作用.pdfVIP

起始识别复合物1基因在血管平滑肌细胞DNA复制中的作用.pdf

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·122· .论著 起始识别复合物1基因在血管平滑肌细胞 DNA复制中的作用 江明宏舒茂琴覃跃龙王倩 【摘要】 目的探讨起始识别复合物1(ORCl)在血管平滑肌细胞(VSMC)DNA复制中的表达 及其意义。方法采用组织块贴片法原代培养的大鼠胸主动脉VSMC,利用双胸苷阻断、秋水仙素阻 抑法和血清饥饿法使VSMC达到细胞周期同步化,用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)技术和Western 0RCl blot检测不同细胞周期的VSMCmRNA和蛋白表达。结果同步化的VSMCDNA含量百分比, 血清饥饿法以G。G,期为主(P0.01),双胸苷阻断14h以GoGl期为主(P0.01),双胸苷阻断 14h后10%胎牛血清刺激6h以S期为主(P0.01),秋水仙素培养12h以G:/M期为主(P 0.05)。静止状态VSMC的ORClmRNA和蛋白质无表达,处于G,/S期VSMC的ORClmRNA表达量 mRNA变化规律相似。结论 显著高于S期和G2/M期。VSMC的ORCl蛋白质表达量与ORCl ORCl随细胞的分裂周期而表达,ORCl可能是启动VSMCDNA复制的关键因子。 【关键词】真核细胞起始因子类;肌,血管,平滑;细胞周期 of 1 inDNA ofvascularsmoothmusclecells Expressionoriginrecognitioncomplexgene replication JIANG Ming—hong,SHUMao-qin,QINYue—long,蹦ⅣGQian.DepartmentofCardiology,South—west Medical 400038,China Hospital,ThirdMilitary University,Chongqing author:SHU Corresponding Mao—qin(E—mail:Shumaoqin@sina.com) To the of 【Abstract】0bjectiveexploreexpressionoriginrecognitioncomplex1(ORCl)during DNA of muscle VSMCofthoracicaortainratswere the replicationvascular cells(VSMC).Methods obtainedtheadherencemethodoftissueculture.Thecell Wasobtainedthemethodof by synchrony by of block.colchicinetreatmentandserumstarvation.The ORClmRNAat double—thymidine expression of was differentcell ofVSMCWasdeterminedRT—PCRandthe ORCl cycles by proteinexpression analyzed Westernblot.ResultsCulturedVSMCwereidentified and by bylightmicroscopeimmunocytochemistry. ofORClmRNAand ina ofVSMCwerenot Significantexpression proteinquiescentst

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