第三章节核酸化学-制药幻灯片.pptVIP

* 1、DNA复性的概念 变性DNA在适当条件下，又可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 热变性DNA经缓慢冷却后即可复性，也称为退火 DNA复性速度受温度的影响。复性时温度缓慢下降才可使其重新配对复性。如加热后将其迅速冷却至4 ℃以下，则不可能发生复性。 比Tm低25℃为DNA复性的最佳条件。 二、核酸的复性 * * * 三、分子杂交 定义：在退火条件下，不同来源的DNA互补区形成氢键，或DNA单链和RNA链的互补区形成DNA-RNA杂合双链的过程。 * 核酸是在1869年由瑞士的青年科学家米歇发现的，他从外科绷带脓细胞的细胞核中分离得到一种含磷量很高的新的特殊有机化合物，并把它命名为“核素”。米歇发现的核素，实际上就是含有蛋白质的核酸制品，即核蛋白。 1889年科学家奥尔特曼从酵母及其他动物细胞中分离得到不含蛋白质的核酸，并首先用“核酸”命名他的制品。 核酸当时是指从细胞核中分离出来的酸性物质。后来研究发现细胞质、线粒体、叶绿体、无核结构的细菌和没有细胞结构的病毒都含有核酸。但核酸这一名称仍然保留而沿用至今。 1909年其组成被研究清楚，1944年生物功能初步澄清，在X射线衍射技术支持下1951年结构澄清。 * 1.在少数生物有机体中，RNA也是遗传物质。主要是在病毒中。 * 核酸（DNA和RNA）是一种线性多聚核苷酸，它的基本结构单元是核苷酸。 核苷酸本身由核苷和磷酸组成, 而核苷则由戊糖和碱基形成 * 另外，RNA中还含有少量的修饰戊糖，即D-2-O-甲基核糖。核酸中的这些戊糖均以呋喃型存在，并以b-糖苷键与碱基连接。 * 核酸中的碱基有两大类：嘌呤碱和嘧啶碱。它们是含N的杂环化合物，呈弱碱性，故称为碱基，亦称含N碱。 * 可与钠、多胺、组蛋白结合。 DNA平均含磷量为9.9%，RNA为9.4%。常用测定生物组织中核酸磷的含量来表示核酸的含量，称为定磷法。 * 细胞内的核苷酸均为5‘-核苷酸，RNA在碱催化下水解可生成2‘-和3’-核苷酸。 * ATP是生物体内分布最广和最重要的一种核苷酸衍生物。 ADP含1个高能磷酸键，ATP含2个高能磷酸键。用～表示。 细胞内的核苷三磷酸都是高能磷酸化合物，在生化反应中作为能量和磷酸基团的供体（以ATP最为重要）也是合成核酸和其它有机物的原料。 脱氧核苷三磷酸是合成DNA的原料，而核苷三磷酸是合成RNA的原料。 * 它们在代谢调节中起重要作用。 （四）核苷酸的生物学作用 （1）参与DNA、RNA的合成、蛋白质的合成、糖与磷脂的合成。 （2）在能量转化中起重要作用，ATP是生物体内能量的通用货币。 （3）是构成多种辅酶的成分：NAD、NADP、FAD、FMN和CoA。 （4）参与细胞中的代谢与调节（cAMP、cGMP）。 * 1953年，沃森（J. Watson）和克里克（F. Crick） 在前人研究工作的基础上，根据DNA纤维和DNA结晶的X-衍射图谱分析及DNA碱基组成的定量分析以及DNA中碱基的物化数据测定，提出了著名的DNA双螺旋结构模型，并对模型的生物学意义作出了科学的解释和预测。 * 大沟的宽度为1.2nm，深度为0.85nm;小沟的宽度为0.6nm,深度为0.75nm. 双螺旋中的大沟，对于DNA和蛋白质结合时的相互识别很重要 ，在沟内可以辨认碱基的顺序。 两条链的碱基对应关系是互补的，因此一条链被称为是另一条链的互补链。 * 碱基堆积力 ：在DNA双螺旋中，上下碱基对的间距只有0.34nm，因此双螺旋内部的碱基对在垂直方向堆积起来形成碱基堆积力。 氢键：虽然它是一种由静电作用力引起的弱的次级键，不稳定，易打开，但又易恢复，许许多多氢键总和的作用力是很大的，因此它是维持双螺旋结构稳定性的主要因素之一。 另外还有范德华力和离子键。 * 1、天然状态的水溶液中的DNA为B-DNA，若降低湿度或在水溶液中加入乙醇，可使B-DNA变成A-DNA. 2、天然DNA中有Z-型构象存在，B-DNA与Z-DNA可相互转变，并处于某种平衡状态，一旦破坏这种平衡，基因表达可能失控，所以推测Z-DNA可能和基因表达的调控有关。 3、由于第三条链的胞嘧啶被质子化（H+）化才能参与配对，故又称H-DNA.它跟双螺旋结构相似，都是通过DNA单链之间形成氢键来实现的。 * 在细胞中，由于DNA与其它分子（如蛋白质）的相互作用，使DNA双螺旋进一步扭曲成环状或麻花状形态，称为DNA的三级结构 。 DNA正常的双螺旋结构处于能量最低状态，两条链相互缠绕以每圈10bp形成B-DNA双螺旋，各原子处于正常位置，双螺旋中没有张力而处于松弛状态。如果这种正常双螺旋额外增加