第六部分生物监测技术幻灯片.pptVIP

6.3 细菌检验监测技术 细菌总数法是细菌学检验法的一种主要方法。它是指1mL水样在营养琼脂培养基上，于37℃经24h培养后所生长的细菌茵落的总数 细菌总数是检验一般水域污染的标志 6.3.1 细菌总数的监测技术 测定细菌总数的主要程序： 1. 灭菌 (1)于热灭菌：将试管、平皿、吸管等玻璃仪器，装入于热灭菌箱中160℃灭菌2h (2)高压蒸汽灭菌：稀释水、培养基、采样瓶等置于高压蒸汽灭菌中，经115℃(10磅／in2)高压蒸汽灭菌20min。 (4)蒸汽灭菌：采用蒸汽灭菌器，在100℃常压下，每次定时灭菌。 (5)火焰灭菌：此法灭菌时应用远火徐徐加热．然后再于火焰焰心灼烧为妥 2．营养琼脂培养基的制备：称取108蛋白胨、3g牛肉膏、5g氯化钠及10一20g琼脂溶于1000m1蒸馏水中，加热至琼脂溶解，调节PH为7．4—7．6过滤，分装于玻璃容器中，经高压蒸汽灭菌20min，贮于冷暗处备用 6.3.1 细菌总数的监测技术 3．试样培养 (1)取定量混合均匀的水样(或稀释后水样)注入灭菌平皿中，倾入15ml已融化并冷至45℃左右的营养琼脂培养基，旋摇平皿使其混合均匀。应做两份实验。 (2)待平皿上试样凝固后，将平皿倒置于恒温箱中37℃培养24h，然后进行菌落计数。 (3)用营养琼脂培养基同时进行空白对照实验 4. 菌落计数：作平皿菌落计数时，可用眼观察，也可用放大镜观察，求出1ml水中的干均菌落数。进行稀释水样计数时，应采用平皿内有30一300个苗落的稀释度进行计算 6.3.2 大肠杆菌的监测技术 大肠杆菌(Eshllus coli)是指示粪便污染的重要指示生物 在大肠菌群系一群需氧又兼性厌氧的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠苗群数指每升水样中所含有的大肠菌群的数目 大肠菌群检验方法有发酵法和滤膜法 6.3.2 大肠杆菌的监测技术 1. 发酵法 这是根据大肠菌群使乳糖发酵产生酸和气的特性而进行检验，如产破产气者，大肠菌群则为阳性 培养基的种类： (1)乳精蛋白胨培养液； (2)三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液； (3)品红亚硫酸钠培养基(供发酵用) (4)伊红美蓝培养基 6.3.2 大肠杆菌的监测技术 检验大肠菌群主要程序 初步发酵试验：初步发酵试验在灭菌操作条件下，取定量水样加入3倍浓缩乳糖蛋白陈培养液中，于37℃恒温培养24h 平板分离：经24h培养后，将产破产气及只产酸的发酵管，分别接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上，再恒温培养24h，然后分别选择菌落 复发酵试验：上述涂片镜检茵落如为革兰氏阴性无芽脑杆菌，可进一步挑取该菌落的另一部分接种于乳糖蛋白胨培养液中，于37℃恒温培养24h，有产酸产气者，即证实有大肠茵群存在 大肠菌群计数：根据以上试验证实有大肠茵群存在的阳性管数，查大肠苗群检数表，报告每升水样中大肠菌群数 6.3.2 大肠杆菌的监测技术 2. 滤膜法 滤膜是采用一种微孔薄膜，按灭菌操作将水样注入具有滤膜的过滤器中，经抽滤，细菌被截国在膜上，后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上，进行恒温培养16—18h，符合上法所述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检 凡属革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌者，再接种于乳糖蛋白胨培养18h产酸产气者，判断为大肠菌群阳性 1L水样中大肠菌群数等于滤膜上生长的大肠菌群落总数乘以3 6.4生物毒性试验监测技术 6.4.1 水生生物急性毒性试验 水生生物急性毒性试验(acute toxicity test for aquatic organism)是测定高浓度污染物在短时期(一船不超过几天)内对水生生物所产生的急性毒性作用，用以评价污染物毒性的实验方法 通过水生生物急性毒住试验可以确定半数存活浓度(TLm)或半数致死浓度(TL50)．并用来评价污染物的毒性大小和性质。 还可粗略了解毒物引起生物体中毒的症状和特点，以判断毒物的毒性强弱和水环境的污染程度，并为制定在环境中的毒物最大容许浓度提供基本数据 6.4.1 水生生物急性毒性试验 1. 试验生物的选择 常用的是小型水生生物，主要是鱼 为了避免受试生物个体差异过于悬殊，应选择种属较纯，年龄、大小、体重差别不大．雌雄性别各半的动物 2. 试验容器及设备 饲养水槽 试验容器 恒温设备 6.4.1 水生生物急性毒性试验 3. 实验方法 将受试鱼随机分组 试验前，受试动物要在实验室内饲养 7—10d，以观察其活动是否正常 试验期间，对照组动物的死亡串应低于5％ 急性毒性试验期间一般不喂食，从致毒开始就观察记录动物中毒表现，生理、生化变化和死亡情况，并将观察结果在半对数坐标纸上用内插法或外推法求出动物的LC50、动物全部死亡的最小浓度(LC100)和动物全部存活的最大毒物浓度(LC0)即最大耐受浓度 急性毒性试验