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微 生 物 学 实 验 报 告 （格式标准） 　　 　　(生命科学专业) 　　 　　教 师：黎 勇 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　目录索引 　　 　　实验一　油镜的使用和细菌的简单染色法 3 　　实验二　细菌的革氏染色与芽孢染色 5 　　实验三　常用培养基的配制 7 　　实验四　酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别 8 　　实验五、微生物大小的测定与显微计数 10 　　实验六　环境中微生物的检测和分离纯化 11 　　实验七　细菌鉴定中常用的生理生化反应 12 　　实验八　（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化 13 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　课程名称：　微生物学　　　　　　　实验班级：化生系生命科学本科 　　实验日期：　　　　　　　　　　　　指导教师：黎勇 实验一　油镜的使用和细菌的简单染色法 　　〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。 　　〔基本原理〕 　　1. N·A=n·sinα 　　2. D=λ/2N.A 　　3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。 　　4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。 　　〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。 　　〔方法步骤〕： （一） 油镜的使用 镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中　　聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形　　在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油　　油镜转入正下方　　　侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）　粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）　仔细观察并绘图 取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油　　擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）　　　用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。 （二） 细菌的简单染色法：涂片　　干燥　　火焰固定　　染色　　（三） 细菌运动性的观察　取洁净盖玻片，四周涂上凡士林　　　滴加一小滴菌悬液　　凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上　　翻转观察 　　〔结果分析〕 　　1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。（描绘时按视野实际大小5－10倍绘制） 　　 　　 　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　　　菌名：大肠杆菌　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　菌名：金黄色葡萄球菌 　　　　放大倍数：100×10（×5）　　　　　　　　　 放大倍数：100×10（×5） 　　　　特殊结构：无 特殊结构：无 　　视野观察下微生物的形态 　　2、油镜使用时为什么必须干燥装片？ 　　防止水油分层，光受到折射而影响油镜性能的发挥 　　〔实验讨论〕 　　首次实验中有几个要点：一是按无菌操作取用菌；二是涂片技术的掌握；三是油镜使用技术。凡实验中学生的所思所想，如无菌操作技术要点、自行处理实验材料、失败与思考等均可进行讨论（如涂片时蒸馏水不宜过多、取用菌时防止菌被灼烫变形、取菌宜少不宜多等均是可以讨论的内容）。 实验二　细菌的革氏染色与芽孢染色 　　〔目的要求〕观察细菌菌落的特征；掌握简单染色法、革兰氏染色法的原理及操作步骤；在油镜下观察细菌个体形态；学习环境中微生物的检查方法，并加深对微生物分布广泛性的认识 　　〔器材用具〕E.coli\B.subtilis\S.aureus.的斜面培养物（18－24小时）以及菌落平板各一个；染液：草酸铵结晶紫、划兰氏染液、卢戈氏碘、95%的乙醇、蕃红；无菌水、显微镜、载片、滤纸、液体石蜡是、、擦镜纸、接种环。 　　〔方法内容〕： 　　（一）实验室环境中微生物的检查 　　（二）革兰氏染色法　涂片固定　　冷却　　结晶紫染色1min　　水洗　　碘媒染1min　　95%乙醇30-60s　　水洗　　番红复染2－3min　　　水洗　　　干燥　　　油镜镜检 　　（三）芽孢染色　涂片固定　　　孔雀绿加热染色（勿干）5min　　水洗