人教版高中生物选修（一） 3.1菊花的组织培养 课件 (共51张PPT).ppt

使 用 顺 序 实 验 结 果 使 用 比 例 实 验 结 果 生长素 细胞分裂素 生长素 细胞分裂素 生长素 细胞分裂素 ＝ 有利于根的分化，抑制芽的形成 有利于芽的分化，抑制根的形成 促进愈伤组织的形成 激素的使用顺序、使用量及比例影响植物细胞的发育方向： 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素，后使用生长素 同时使用 细胞既分裂也分化 分化频率提高 菊花的组织培养程序： 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培养 移栽 栽培 实验流程图： 课外拓展 MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 基于此，这种培养基就用他们的名字来命名了。 MS培养基主要成分： ①大量元素: N、P、 K、 Ca、 S 、 Mg等 ②微量元素: B、Mn、Cu、Zn、 　　　　　 Fe、Mo、I、Co等 ③有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、 维生素、蔗糖等 ④植物激素：生长素、细胞分裂素、 赤霉素等 微生物培养基的配方和MS培养基的配方相比，有哪些明显的不同？ 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同， MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 （一）制备MS固体培养基： MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。 1．配制各种母液： ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩 100倍，常温保存。 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/mL的质量浓度单独配制成母液。 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的 浓缩倍数，计算用量。 实验操作 2．配制培养基： 分装到锥形瓶中，每瓶分装50mL或100mL。 ① 配制培养液：配制1LMS培养基时，先将称好的琼 脂加入800mL蒸馏水，加热使琼脂熔化，然后加入 蔗糖30g，取配制好的大量元素、微量元素、有机 物和植物激素的母液，依次加入，加蒸馏水定容 至1000mL。 ② 调pH： ③培养基的分装: 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因 此不必添加植物激素。 3．灭菌： 将分装好的培养基连同其他 器械一起进行高压蒸汽灭菌。 1．选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝。 （二）外植体消毒： 2．消毒： ① 流水冲洗： 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。 ② 酒精处理： 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2～3次，持续6～7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。 ③ 消毒液处理： 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1～2min，取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液。 (外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。) （三）接种： 接种前用体积分数为70％的酒精将工作台擦拭一遍，然后点燃酒精灯。因为污染的主要来源是空气中的细菌和孢子。 1．接种室消毒： 2．无菌操作要求： 所有的接种操作都必须在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。 3．材料的切取和接种： 将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成0.5～1cm的小段，用镊子夹取菊花茎段接种。 4．接种注意事项： ① 每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为 70％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火 焰上烧一遍，冷却后再接种。 ② 外植体在培养基中要分布均匀，放置外植 体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝 卜3～4块，菊花6～8块，也不要太少，以 充分利用培养基中的营养成分和光照条件。 ③ 插入时应注意茎段方向，形态学上端朝上， 形态学下端朝下，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分。 （四）培养： 接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在18～22℃。 每日用日光灯光照12h。 （五）移栽： 1．打开封口膜： 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的