第五章 动物细胞制药(二).ppt

第五章 动物细胞制药 动物细胞的生产特征 （动物细胞的培养条件和培养基）； 动物细胞培养技术（培养方法和操作方式） ； 动物细胞生产举例。 第四节 动物细胞的生产特征（动物细胞的培养条件和培养基） 培养条件； 培养基。 一 细胞体外培养基本条件 无菌； 水质（＊）； 温度（＊）； 氧气（＊）； pH值（＊）； 渗透压； 随时清除代谢有害产物； 及时分种：保持合适的细胞密度。 器材的清洗和消毒 比细菌要求高：耐受力10-6mg，贴壁。 器材的清洗：浸泡、刷洗、泡酸、冲洗； 器材的消毒灭菌：物理消毒、化学消毒； 细胞中常用的消毒剂、浓度及使用场合；（P93表3－4）； 细胞培养中常用的抗生素及其使用浓度（对此问题有争议，很多人不主张用的原因有二）（P93表3－5）。 水质 去除： 有毒元素； 金属离子； 微生物； 热原质等。 方法： 离子交换；电渗析；反渗透；过滤等。 标准：电阻值18M欧姆。 温度 不同种类的细胞要求不同，变温动物对温度要求没有恒温动物严格； 哺乳动物细胞最佳培养温度为（37±0.5）℃； 耐受温度范围较窄，35℃～37℃； 细胞受伤：39℃～40℃ 11小时，但能恢复； 受伤严重：41℃～42℃，部分可恢复； 死亡：43℃以上。 细胞对低温的耐受性比高温要强，低温抑制生长，但无伤害作用。 氧气 动物细胞生长必须有氧气； 方瓶或转瓶培养：装液量=30％，液面获取; 反应器：专门通气。 离体培养的气体：含有5％CO2和95％空气，其中氧浓度为21％； 高氧环境：O2浓度60%以上，对细胞毒性较大，抑制生长和增殖，出现染色体异常等现象； 有时充以N2气稀释O2浓度。 pH值 细胞的最适pH7.2~7.4，而且在血液和体液中，变化范围很小； 低于6.8或超过7.6会对细胞产生严重影响甚至使细胞死亡； 人体：血液pH比较恒定，7.36～7.44； 低于7.05发生酸中毒，高于7.45发生碱中毒； 常用的缓冲体系有：碳酸盐缓冲体系和磷酸盐缓冲体系。 渗透压 正常血浆渗透压为290～300 mOsm /kg； 等渗溶液； 增减NaCl 的浓度调整渗透压。 二 对培养基组成要求高 动物细胞对培养基的要求高； 培养基组成的成分； 动物细胞培养基的种类； 培养基质量的控制。 （一）动物细胞对培养基的要求高 完全异养，容易利用相对低分子量的营养物； 12种必需氨基酸； 8种以上维生素； 多种无机盐和微量元素； 多种附加成分：生长类、细胞因子和贴壁因子及激素、结合蛋白质等； 能源：单糖（葡萄糖），谷氨酰氨； 氮源：氨基酸单体化合物。 （二） 培养基组成的成分 水 ； 能源和碳源物质 ； 氮源（氨基酸）； 维生素 ； 无机离子 ； 生长类因子及激素； 结合蛋白质； 贴附与伸展因子及其它附加成分等。 能源和碳源物质——糖类 利用：单糖单体化合物； 主要：葡萄糖（常需要补丙酮酸钠）和谷氨酰胺； 不能利用：多糖、双糖、寡糖等聚合物； 有时加核糖、脱氧核糖和乙酸钠等。 氮源——氨基酸 不能利用：多肽、蛋白质等高分子聚合物； 利用：氨基酸等单体化合物； 12种AA必须添加：Arg、Cys、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Thr、Trp、Tyr、Val；（Tip，Hall，MTV，CT） 细胞只能利用L型AA； 谷氨酰胺:重要碳源和能源。 维生素 作用：对代谢和生长起调节和控制作用； 水溶性维生素B\C； 脂溶性维生素ADEK。 无机盐类（2－1） 作用： 酶的辅基，调节酶活性； 细胞构成成分； 参与生理电活动； 维持水平衡、保持渗透压； 维持酸碱平衡； 一般为生理盐水的离子浓度（0.9%）。 无机盐类（2－2） Ca2＋、Mg2＋是细胞的构成成分，对细胞间的互黏稳定起重要作用； 碳酸盐缓冲液是重要的体内缓冲体系； 微量元素有Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Mo、F、Se、Cr、I等是酶的组成成分，调节酶活性。 生长类因子与激素（3－1） 激素：胰岛素是最常用的激素，使用浓度为1～10μg/ml，对细胞的生长有刺激作用； 细胞因子：有表皮生长因子、成纤维细胞生长因子和神经细胞生长因子，根据不同细胞添加； 贴附因子：如纤维结合蛋白、胶原等； 脂类化合物：细胞生长必需的，类脂及其前体和血清常平行使用。特别是缺陷性细胞，对某种脂类有很高的依赖性。 生长类因子与激素（3－2） 铁传递蛋白：离子载体作用，有时用无机铁盐代替； 保护剂： 作用：保护细胞免受由渗透压变化、剪切、毒性金属和氧化所引起的损伤的物质。 主要是某些大分子化合物：如甲基纤维素、葡聚糖、PEG、聚乙烯吡咯烷酮、血清白蛋白等。 生长类因子与激素（3－3） 还原剂：某些还原剂有特殊作用，如β－巯基乙醇在杂交瘤细胞培养中能刺激抗体分