第三章之五还原糖的测定.pptVIP

还原糖的测定 一、概述 1、碳水化合物分类 单糖：葡萄糖，半乳糖，果糖，核糖, 阿拉伯糖，木糖 双糖：蔗糖、乳糖、麦芽糖 多糖：淀粉、纤维素、果胶 2、可溶性糖的提取与澄清(可溶性糖：葡萄糖、果糖、蔗糖) 3、澄清剂 二、还原糖的定义 糖类分子中含有游离醛基或酮基的单糖和含有游离潜醛基的双糖都具有还原性。 如 葡萄糖分子---游离醛基 果糖---游离酮基 乳糖、麦芽糖---游离潜醛基 蔗糖、三糖、多糖，本身是非还原性糖但可以水解生成相应的还原性单糖，测定水解液的还原糖含量就可求样品中相应含量。因此，还原糖的测定是一般糖类定量的基础。 三、直接滴定法(国标法） 1、试剂 ① 碱性酒石酸铜甲液：15g无水硫酸铜+0.05g次 甲基蓝+水 → 1000mL ② 碱性酒石酸铜乙液：50g酒石酸钾钠+75g氢氧化钠+4g亚铁氰化钾+水→ 1000mL ③ 乙酸锌溶液：21.9% ( 3%醋酸） ④ 10.6%亚铁氰化钾 ⑤ 0.1%葡萄糖标准溶液（1mg / mL） 2、原理 ①+②→酒石酸钾钠酮（氧化性） 酒石酸钾钠酮 +还原糖 →氧化还原反应 次甲基兰作指示剂，终点：兰色→无色 （1）CuSO4 + NaOH =Cu(OH)2 +Na2SO4 COOK COOK (2)Cu(OH)2 + CHOH → HCO Cu+2 +H2O CHOH HCO COONa COONa （3） CHO COOK (CHOH)4 + CHO Cu +H2O 6e CH2OH CHO COONa COOK COOH + CHOH + 3Cu2O ↓ + H2CO3 (CHOH)3 CHOH CH2OH COONa (4) 还原糖 + 次甲基兰（氧化型，兰色）→ 葡萄糖酸 +次甲基兰（还原型，无色） 说明 从上述反应式可知，1mol葡萄糖可还原6 mol二价铜为亚铜。实际上，因为副反应的存在，两者之间的反应并非那么简单。实验结果表明， 1mol葡萄糖只还原5mol多，且随反应条件变化而变化。因此不能按照上述计量关系计算葡萄糖含量。只能 （1）用已知浓度的葡萄糖标液标定法; E = 0.5% （2）查通过实验绘制的还原糖检索表; E = 1% 补充材料 还原糖与碱性酒石酸铜的反应，其他写法： 还原糖+碱性酒石酸铜→一元酸，不降解， 得失2e 还原糖+碱性酒石酸铜→二元酸，不降解， 得失6e 试验研究表明 （1）还原糖的电子转移数接近6 （2）反应后的溶液有相当量的CO3 2- （3）碱性铜盐是中等强度的氧化剂，在此条件 下，不易将葡萄糖氧化成二酸 3、适用范围 试剂用量少，操作、计算比较简便、快速，滴定终点明显。适用于各种食品中还原糖的测定。但测酱油、深色果汁等，终点受干扰，影响准确性。 4、测定方法 （1）样品处理 适量样品+提取→ 250mL容量瓶 + 5mL Zn（Ac）2 + 5mL K4Fe（CN）6 → 摇匀、静置 30min → 干过滤 → 滤液 （2）碱性酒石酸钾钠铜溶液的标定（ 250mL锥形瓶 ） 甲液5.00mL 乙液5.00mL +水10mL+9mL葡萄糖标液（滴管放入）→加热使其在2min内沸腾，准确沸腾30s，趁热以1滴 / 2s继续滴加标液，直至兰色刚好褪色。记录消耗葡萄糖标液总体积。平行三次，取平均值。 f = c0 ×V0 c0 ------ 葡萄糖标液浓度，mg/ mL V0 ------标定10mL碱性酒石酸钾钠铜消耗 葡萄糖标液的体积，mL f ------ 10mL碱性酒石酸铜溶液相当葡萄 糖的质量，mg （3）样品溶液预滴定 同（2），只是把葡萄糖标液换成样品溶液来滴定，记录样品溶液消耗体积V。 （4）样品溶液测定 甲、乙液各5.00m