第二章-酶的发酵与生产.pptVIP

 现代酶工艺的历史开始于1874年，丹麦人汉森用盐溶液从牛胃中抽提凝乳酶。 最初的商品酶制剂主要以动植物为原料提取 如: 从牛胃中提取凝乳酶 从胰脏中提取胰酶 从血液中提取凝血酶 从植物材料中提取淀粉酶 应用微生物来开发酶的优点 (1)微生物种类繁多，凡是动植物体内存在的酶几乎都能从微生物中得到; (2)微生物繁殖快，生产周期短，培养简便，能通过控制培养条件大幅度提高酶的产量； (3)微生物具有较强的适应性，通过各种遗传变异手段 　能培育出新的、高产的产酶菌株。 第二章 酶的发酵生产 第一节 酶生物合成的调节机制 第二节 酶的发酵技术 第三节 酶的发酵动力学 1.举例说明何谓基因表达的诱导与阻遏，正调控与负调控？（10分） 2.试对乳糖操纵子的正调控和负调控提出较合理的分子解释。（10分） 3.终产物阻遏 分解代谢产物阻遏（葡萄糖效应） 反馈抑制 二、真核生物中酶生物合成的调节 （一）细胞分化改变酶的生物合成 （二）基因扩增加速酶的生物合成 （三）增强子促进酶的生物合成 基因扩增是通过增加基因拷贝数而调节基因表达的一种方式，为特定蛋白质编码的基因拷贝数选择性地增加，而其他基因并未按比例增加的过程。 它可以发生在个体发育的某一阶段或细胞分化的某一过程。 例如，在非洲爪蟾的卵母细胞中原有rRNA基因（rDNA）约200个拷贝，在减数分裂Ⅰ的粗线期，这个基因开始迅速复制，到双线期它的拷贝数约为200万个，扩增近4000倍，可用于合成1012个核糖体，以满足卵裂期和胚胎期合成大量蛋白质的需要。 例如：中国田鼠细胞在含有氨甲基喋呤的培养基中生长时，由于氨甲基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂，为了对抗氨甲基喋呤对酶的抑制作用，细胞中编码二氢叶酸还原酶的基因急剧大量扩增，以合成大量的二氢叶酸还原酶。 基因扩增的生理意义在于：在特殊条件下，作为应急手段，可以调节酶的合成，而使某种酶的合成大量增加。 增强子是远离转录起始点、决定基因的时间、空间特异性表达、增强启动子转录活性的DNA序列，其发挥作用的方式通常与方向、距离无关。从功能上讲，没有增强子存在，启动子通常不能表现活性；没有启动子时，增强子也无法发挥作用。 增强子可提高同一条DNA链上基因转录效率，可以远距离作用，通常距离l～4kb，个别情况下离开所调控的基因30kb仍能发挥作用，而且在基因的上游或下游都能起作用。 增强子作用与其序列的正反方向无关，将增强子方向倒置依然能起作用。而将启动子倒置就不能起作用，可见增强子与启动子是很不相同的。 增强子要有启动子才能发挥作用，没有启动子存在，增强子不能表现其活性。但增强子对启动子没有严格的专一性，同一增强子可以影响不同类型启动子的转录。 增强子必须与特定的蛋白质因子结合后才能发挥增强转录的作用。增强子一般具有组织或细胞特异性，许多增强子只在某些细胞或组织中表现活性，是由这些细胞或组织中具有的特异性蛋白质因子所决定的。例如，人类胰岛素基因5’端上游约250个核苷酸处有一组织特异性增强子。在胰岛素β细胞中有一种特异性蛋白因子，可以作用于这个区域，以增强胰岛素基因的转录。在其他组织细胞中没有这种蛋白因子，所以也就没有此作用。这就是为什么胰岛素基因只有在胰岛素β细胞中才能很好表达的重要原因。 大多为重复序列，一般长约50bp，适合与某些蛋白因子结合。其内部常含有一个核心序列，即(G)TGGA／TA／TA／T(G)，是产生增强效应时所必需的。 增强效应十分明显，一般能使基因转录频率增加10—200倍。经人巨大细胞病毒增强子增强后的珠蛋白基因表达频率比该基因正常转录高600～1 000倍。 许多增强子还受外部信号的调控，如金属硫蛋白的基因启动区上游所带的增强子，就可以对环境中的锌、镉浓度做出反应。 增强子的功能是可以累加的。SV40增强子序列可以被分为两半，每一半序列本身作为增强子功能很弱，但合在一起，即使其中间插入一些别的序列，仍然是一个有效的增强子。因此，要使一个增强子失活必须在多个位点上造成突变。对SV40增强子而言，没有任何单个的突变可以使其活力降低10倍。 三、酶生物合成调节作用机理的实际应用 （一）酶的生产 在生产实践上，常采用一些必要的手段避免分解代谢物阻遏作用。如在青霉素发酵中利用乳糖代替葡萄糖可提高产量；在用嗜热芽孢杆菌生产淀粉酶时，用甘油代替果糖使淀粉酶的产量提高25倍。 生产?－半乳糖苷酶时，加入乳糖结构类似物，如异丙基－ ?－D硫代半乳糖苷和甲基?－半乳糖苷等非代谢物质作为诱导物时，也可诱导合成。 （二）微生物的选育 在发酵工业中，要选择到一种廉价、高效的诱导物是不容易的，分批限量加入诱导物在工艺上也多不便，更为有效的方法是改变菌株的遗传特性，除去对诱导物的