节杆菌和大肠杆菌海藻糖6磷酸合成酶在低温下的催化效率比较.pdfVIP

摘要 海藻糖是一种非还原性二糖分子，它可在干燥、脱水、热胁迫、冷胁迫、氧 化胁迫、渗透压胁迫等多种胁迫环境下对生命体起保护作用，广泛存在于除高等 动物以外的生命体中。otsA／otsB途径是生命体合成海藻糖的主要途径，otsA基 因编码海藻糖-6．磷酸合成酶，它以葡萄糖．6．磷酸和UDP．葡萄糖作为底物，生成 海藻糖．6．磷酸和UDP。OtsB催化海藻糖．6．磷酸生成海藻糖。UDP-葡萄糖在冷 信号传导中起重要作用，海藻糖．6．磷酸调控着体内糖的代谢，都对生命体在逆 境中的存活与生长起重要作用，它们分别是OtsA的底物和产物，因此研究不同 生长环境中的生命体的OtsA催化效率具有重要意义。 本实验所用实验材料为节杆菌和大肠杆菌，此株节杆菌为耐冷菌，其OtsA 与中温菌大肠杆菌的OtsA作酶动力学比较，通过不同温度下一系列酶学参数的 分析，得出节杆菌OtsA在低温下较之大肠杆菌的优越性，从而为研究耐冷菌的 耐冷机制奠定基础。 利用PCR技术扩增出大肠杆菌和节杆菌中的otsA基因，连接入T载体，转 入大肠杆菌DH5ct，再用限制性内切酶将基因片段切下，连接入pET表达载体， 转入大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导后，工程菌大量表达重组蛋白。利用亲和 层析法分离纯化目的