转染绿色荧光蛋白表达载体教学讲义.pptVIP

转染绿色荧光蛋白表达载体 绿色荧光蛋白（GFP)是1962年从水母中发现的一个荧光蛋白，1992年被克隆，近年得到广泛应用。其分子中的发光基团对蓝色光照特别敏感。当它受到蓝光照射时，会吸收蓝光的部分能量，然后发射出绿色的荧光。 美籍华人钱永健在1995年完成的单点突变（S65T）。这个突变显著提高了GFP的光谱性质，荧光强度和光稳定性也大大增强。突变后的GFP激发峰转移至488 nm，而发射峰仍保持在509 nm，这和常用的FITC滤光片匹配，提高了GFP的应用潜力。 而F64L点突变则改善了GFP在37℃的折叠能力，综上就产生了增强型GFP，也就是我们常见的EGFP。 其他的突变还包括颜色突变，这其中大部分也是钱永健的功劳。现在有蓝色荧光蛋白（EBFP）、青色荧光蛋白（ECFP）和黄色荧光蛋白（YFP） 于2008年获得诺贝尔奖 作为一种新型的报告基因，GFP已在生物学的许多研究领域得到应用。 将GFP作为蛋白质标签，即利用DNA重 组技术，将目的基因与GFP基因构成融合基因，转染合适的细胞进行表达，然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内活体观察。 利用GFP来检测目标蛋白的定位为我们提供了一种对细胞内的一些基本的生理过程进行更详尽观察的新方法。 肿瘤发病机制的应用 GFP 与目的基因融合，将目的基因标记为绿色，即可定量分析目的基因的表达水平，显示其在肿瘤细胞内的表达