H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达.docVIP

H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达 第21卷1期 2006年1月 中国病毒学 V1RoLoGlCAS1N1CA 2l(1):43.46 January2006 H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达 宋建领,张富强,王金萍,胡媛媛 (厶南省热带亚热带动物病毒病重点实验室,云南昆明650224) CloningandExpressionofNeuraminidaseGeneofH5N1 SubtypeAvianInfluenzaVirus SONGJian.1ing,ZHANGFu,qiang,WANGJun.ping,HUYuan.yuan (YunnanTropicalandSubtropicalAnimalVirusDiseasesLaboratory,Kunming650224,ChinaJ Abstract:Apairofcloneprimersweredesignedandsynthesizedbasedonneuraminidase(NA)gene sequencesofknownAvianinfluenzavirusH5Nlsubtypes.NAgenewereamplifiedfromtotalRNA. whichhadbeenextractedfromallantoicfluidofH5N1subtypevirusinoculatedembryo.byreverse transcriptase—polymerasechainreactionusinghighproofreadingpolymerase(PyobestDNA Polymerase).andexpressedusingInvitrogenchampionpETdirectionalToP0expressionsystem. 53.8kDarecombinantNAfusionwithpolyhistidine(6xHis1taginN.terminalwasexpressedand purified.Itsimmunoreactivityandimmunogenicityhadbeenanalyzed.Theresultsshowedthe recombinantNAcouldnotonlybindtoantiserumagainstH5N1subtypeviruswithspecificitybutalso elicitspecificantibodyinimmunizinganima1.andpossessedgoodantigenicity. Keywords:Avianinfluenzavirus;H5N1subtype;Neuraminidase;Expression 摘要:根据已知H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶基(na)序列设计,合成克隆引物.自H5N1亚型病毒感染 的鸡胚尿囊液中提取总RNA,反转录后采用高可信度DNA聚合酶(PyobestT~DNAPolymerase)扩增na基因, 采用Invitrogen定向表达系统(ChampionMpETdirectionalTOPOexpressionsystem)进行克隆表达,纯化获得N 末端携带多聚组氮酸标签的重组神经氮酸酶,分子量约53.8kDa.分析重组NA的免疫反应性和免疫原性,结果 表明:重组NA能与H5N1亚型病毒抗血清发生特异性结合,且其免异动物后能诱导机体产生特异性抗体,具有 良好的抗原性. 关键词:禽流感病毒;H5N1亚型:神经氨酸酶:表达 中图分类号:$855.3文献标识码:A文章编号:1003.5153(2006)01-0038.05 禽流感(Avianinfluenza,AIorbirdflu)又名欧 洲鸡瘟,真性鸡瘟,是由A型流感病毒引起的一种 禽类感染和疾病综合征….l997,1999,2004.2005 年中国香港,泰国,越南暴发H5N1,H9N2亚型禽 流感,并存在病毒突破种问屏障感染人的病例】,赋 予禽流感全新的公共卫生意义.2004.2005年东南亚 暴发H5N1亚型禽流感,截止到2005年7月6日, 确诊人感染病例108例,死亡54例,扑杀家禽1.4 亿羽,损失惨重.禽流感病毒属于正粘病毒科流感病 毒属A型流感病毒成员,病毒基因组由单股,负链, 8节段RNA组成,编码lO个基因,其中第4,第6 收稿¨期 堆金项II 作者简介 通讯作者 节段RNA分别编码血凝素(HA),神经氨酸酶(NA), 其抗原性差异,确定病毒亚型的划分,目前已知HA 共有l6种亚型(H1.H16),NA共有9种亚型(Nl.N9) l .NA是A型流感病毒主要表面抗原之一,具有糖 苷外切酶活性,可水解细胞表面受体特异性糖蛋白末 端的N.乙酰基神经氨酸.病