组胺对受体亲和力常数(pD2)和拮抗剂对组胺拮抗参数(pA2)的测定.docVIP

实验报告 课程名称： 药理学实验___________________指导老师：______丁玲 __成绩：__________________ 实验名称：组胺对受体亲和力常数（pD2）和拮抗剂对组胺拮抗参数（pA2）的测定_实验类型：_验证型 同组学生姓名：葛倩倩、张敏哲 【实验目的】 利用离体豚鼠回肠制备，观察组胺对受体亲和力及拮抗剂对组胺竞争性拮抗作用，并了解pD2和pA2值的测定方法及意义。 【实验原理】 组胺作用于豚鼠的回肠H1受体，引起肠肌收缩 根据不同浓度的组胺引起肠段收缩高度，求出pD2值 加入拮抗剂，若提高组胺浓度，仍能达到先前的收缩高度，表明拮抗剂对组胺有竞争性拮抗 在加入一定浓度的拮抗剂后，组胺浓度提高1倍就能产生原浓度的效应，而拮抗剂这个摩尔浓度的负对数即为pA2值 本实验采用苯海拉明作为拮抗剂。pD2是激动剂与受体亲和力的定量参数，称为亲和力指数。pA2是竞争性拮抗剂作用强度的参数 【实验材料】 豚鼠、离体器官恒温浴槽、张力换能器、Med Lab记录仪、剪刀等小型手术器械 磷酸组胺溶液[3×10-7mol/L、3×10-6mol/L、3×10-5mol/L、3×10-3mol/L] 盐酸苯海拉明溶液[3×10-7mol/L、3×10-6mol/L、3×10-5mol/L、 3×10-3mol/L] 【实验内容】 取一段备用回肠，两端用缝针穿线，一端系在通气钩上，放入浴槽（台氏液30ml）， 另一端连张力换能器，通过记录仪描记肠段收缩； 让回肠在浴槽内稳定10分钟，记录一段基线，在浴槽内加入药液，观察并记录（约2分钟），当肠段收缩达顶点，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液30ml； 待基线回到用药前水平，记录一段基线，在浴槽内加入下一个药液，开始记录，收缩曲线至顶点开始回落时，停止记录，冲洗2遍，再加台氏液20ml； 如上依次加入不同量的磷酸组胺溶液： 3×10-6mol/L 0.1ml，3×10-5mol/L0.1ml 、 0.25及0.5ml，3×10-4mol/L 0.1、0.25及0.5ml，使浴槽中磷酸组胺的最终浓度为10-8mol/L、10-7mol/L、2.5×10-7mol/L、 5×10-7mol/L、10-6mol/L、2.5×10-6mol/L，5×10-6mol/L，描记不同浓度磷酸组胺所致的肠段收缩曲线； 如 步骤4，每次加药均先在浴槽中加入3×10-5mol/L盐酸苯海拉明溶液0.1ml，使其终浓度为10-7mol/L，然后依次加入不同浓度的磷酸组胺溶液，描记当溶液中有10-7mol/L苯海拉明共存时不同浓度磷酸组胺所致的肠段收缩曲线； 再依次试验盐酸苯海拉明终浓度为10-6mol/L和 10-5 mol/L时，对磷酸组胺的拮抗作用； 描记完毕，测量每次加入磷酸组胺后的收缩曲线高度，将加盐酸苯海拉明前，磷酸组胺引起的肠段收缩极限高度作为100%（Emax），计算不同组胺引起肠段收缩高度相当于极限高度的百分率。以磷酸组胺摩尔浓度的对数值为横坐标，以收缩高度占极限高度的的分数（E/Emax）为纵坐标，作浓度反应曲线图，然后计算pD2值和pA2值。 【实验数据】 实验记录Emax=2.5，明显不准确，但由于Emax数据不影响实验结果，为展示接下来的数据处理过程，取Emax=3.2进行实验操作。 表1 离体回肠在不同苯海拉明溶度下给与磷酸组胺引起的张力（g）变化表 磷酸组胺mol/L 苯海拉明溶度（mol/L） 0 1.00E-09 1.00E-08 1.00E-07 1.00E-05 E E/Emax E E/Emax E E/Emax E E/Emax E E/Emax 1.00E-08 0.106 0.033 1.00E-07 0.178 0.056 2.50E-07 0.660 0.206 5.00E-07 1.325 0.414 0.350 0.109 1.790 0.559 0.055 0.017 0.018 0.006 1.00E-06 1.987 0.621 2.50E-06 2.400 0.750 1.759 0.550 1.924 0.601 0.086 0.027 0.046 0.014 5.00E-06 2.490 0.778 2.360 0.738 2.160 0.675 0.663 0.207 0.095 0.030 1.00E-05 2.880 0.900 2.690 0.841 1.301 0.407 0.263 0.082 5.00E-05