第五讲-配位化学-研究方法技巧-2.pptVIP

荧光寿命τ和量子效率ф (quantum yield) It = I0e-kt, τ = k-1 固有荧光寿命1/τF≈104εmax 结构和动力学信息 ф = 发射量子数/吸收量子数 = 荧光发射速率衰减常数 /退激过程中的总速率常数 = kF/k = τ/τF， k = kF + ∑ki 相对法求待测样品的量子产率 对稀溶液，荧光强度F = kI0AфF F1/F2 = A1фF1/ A2фF2 фF1/фF2 = A2F1/ (A1F2) 淬灭(quenching) 荧光强度F F = IAфFZ (IA激发态的初始分布) IA = I0 – It = I0{1-exp[-2.3ελACl]} ελA—激发波长处的吸光系数， C—浓度， I0—入射光强， It—透射光强， l—光程 F = IAфFZ (IA激发态的初始分布) IA = I0 – It = I0{1-exp[-2.3ελACl]} 稀溶液 -2.3ελACl﹤﹤1， exp[-2.3ελACl] ≈ 1-2.3ελACl IA = 2.3I0ελACl Fλ = IAфFZ = 2.3I0ελAClфFZ 在生物学和生物无机化学中的应用 1) 内源荧光可用于测量蛋白质的浓度。 灵敏度高，无核酸干扰 2）内源荧光可用于测量蛋白质的结构变 化。 3）蛋白质的荧光标记及其应用： 探针特异结合，多氨基和巯基。 研究结合部位的极性、结构和分子运 动等。 4）核酸的荧光标记及其应用： 吖啶橙(Acridine Orange, AO) PY(Pyronine Y)， cis-Ru(2,2’-bipy)2Cl2, Ru(2,2’-bipy)33+等 Tb3+的荧光光谱1.有蛋白质存在时， 2.无蛋白质存在时 5）生物膜的荧光标记：研究膜运输、膜融 合等，动力学研究，膜电位变化 6）金属代谢的荧光监测 Tb3+作为探针研究Ca2+的代谢。 7）用于细胞功能研究。 热化学方法 量热法测定： 转变温度，热焓，比热，差热-热重 应用：生物膜与脂膜的研究，相变热； 蛋白质折叠的热变性研究； 蛋白质与小分子(包含金属)的配位 作用 微生物代谢研究（总放热） 根据细菌的代谢放热特征鉴别菌种 药物筛选 穆斯鲍尔谱 原理：核能级跃迁，γ射线吸收，多普勒效应， 57Fe(Ⅱ,Ⅲ)，Co，40K, 61Ni, 67Zn 参数：1) 同位素位移δ (isomeric shift，同质异能移，mm/s) 化学位移 反映核外电子配置情况、价态、自旋态 2) 核四极距Q和核四极距分裂能ΔEQ 反映原子核周围电荷分布和对称性信息 铁的同位素位移δ 氧化态 自旋态 δ(mm/s) Ⅱ 高 1.3 Ⅲ 高 0.5～0.7 Ⅱ 低 0.1 Ⅲ 低 0 应用： 1）用于研究生物体内铁原子族 的磁偶合现象；混合价态铁原子族 内的电子转移反应速率，时标合适。 2）用于区别生物体内不同种类的铁原 子族，确定铁的形式氧化态。 缺点：57Fe的天然丰度太低。 氧桥和羟基桥双核铁铁配合物的穆斯鲍尔谱 a) [Fe2O(O2CCH3)2(HBPz3)2]  b) [Fe2(OH)(O2CCH3)2(HBPz3)2] 磁性研究 概述 有效磁距μ有效 = 2.83(χT)1/2, χ—摩尔磁化率， 随温度而变 1) 对多电子体系，轨道角动量与自旋角动 量耦合较大，光谱支项间分裂能大于KT 时，如4f, 5f电子 μ有效 = g[J(J+1)]1/2, Lande因子 g = 1+[J(J+1)+S(S+1)-L(L+1)]/[2J(J+1)] L —总角动量量子数， S —自旋量子数， L —总轨道角量子数， J = L + S 2）