临床基因扩增检验实验室的设置质量管理体系的建立及其技术验收.pptVIP

临床基因扩增检验实验室的设置、质量管理体系的建立及其技术验收 山东省临床检验中心 刘春 80年代以来，以核酸为基础的分子诊断技术发展很快，特别随着DNA序列分析、分子合成自动化技术的出现，基因检测技术已应用到生命科学工农业生产领域，极大的推动了人类社会的发展，基因扩增技术在医学领域已广泛应用于微生物学、遗传学、法医学等多个学科。 临床基因扩增检验实验室的设置 卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）。 卫生部临床检验中心《临床基因扩增检验实验室工作规范》 临床基因扩增实验室基本设置 . 各区独立 . 注意风向 . 因地制宜 . 方便工作 临床标本的接收 地点 原始容器 防止泄露和污染 唯一性编号 保存条件 试剂准备区 仪器设备配置标准： 2～8℃和-15℃冰箱；混匀器；微量加样器（覆盖1～1000μl）；移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。超净台。 试剂准备区 试剂分装应在超净台中进行 扩增反应混合液应使用分子生物学级的，试剂制备好后应有质检： 一是否有污染（是否有假阳性存在）、二是使用弱阳性质控物检测试剂的扩增效果。 标本制备区 仪器设备配置标准： 生物安全柜 ， 2～8℃冰箱，-20℃或-80℃冰箱；高速台式冷冻离心机；混匀器；水浴箱或加热模块；微量加样器（覆盖1～1000μl）；可移动紫外灯（近工作台面）；超净工作台，消耗品；一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。 标本制备区 标本的制备应在生物安全柜内进行，可防止气溶胶的扩散。标本制备全过程都应戴一次性手套，并经常更换，手套污染很容易导致标本间的交叉污染。处理具有传染危险性的标本时，最好戴双层手套，当手套与标本有接触时即可弃掉外层手套。 标本制备区 实验时所用的加样吸头必须带滤塞，并注意滤塞不能是后插入的而是结合在吸头内壁上疏水性膜滤塞，这样才能有效防止气溶胶对加样器的污染。 样品处理对核酸扩增有很大影响，必须使用有效的核酸提取方法，可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价。 标本制备区 温育既可在加热模块也可在水浴中进行。加热模块和水浴应在每次使用时，都要对所设置的温度使用已经校准的温度计进行校准。 标本制备区内设备都应使用10%次氯酸钠溶液消毒，然后用水或70%乙醇去除残留的次氯酸纳. 扩增区 仪器设备配置标准： 核酸扩增仪；微量加样器（覆盖1～1000μl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。超净台。配备UPS电源。 扩增区 扩增反应体系的配制和提取核酸的加入应在超净台，关键是要防止产物的污染。加样时，先加提取的核酸模板样本，然后加阳性质控核酸模板，再就是标本制备阴性质控和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控。这样做的目的是最大可能地测出以前扩增产物的交叉污染。 产物分析区 视检测方法不同而定。基本仪器设备如下：微量加样器（覆盖1～200μl）；可移动紫外灯（近工作台面）；消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）；专用工作服和工作鞋；专用办公用品等。 产物分析区 本区是唯一能打开扩增后反应管的地方。由于本工作区应设置为负压状态，空气流向为由外向内，以防止扩增产物气溶胶流出，故本区可无缓冲间。 本区所使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等，酶标仪应定期校准，洗板机每次使用完都应进行清洗，其它如加样器和水浴箱可按有关方法进行校准。 产物分析区 核酸扩增后产物分析方法,如膜上或微孔板上探针杂交方法,琼脂糖凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳,核酸测序等方法。 本区是最主要的扩增产物污染来源，因此必须注意避免通过本区的物品及工作服将扩增产物带出。由于本区有可能用某些可致基因突变和有毒物质，故应注意实验室人员的安全防护。 质量管理体系的建立 质量手册 程序文件 标准操作程序（SOP） 质量手册 定义：阐明一个实验室的质量方针，质量体系与质量工作的文件。 主要内容包括目录、批准页、前言、质量方针、组织结构、科室设置及布局、资源配备、管理过程等,宜以简明的流程图形式表达。确保质量管理的原则性描述。提供服务质量的承诺、质量方针、目标以及承担者，责任和指导性文件。 程序文件 程序文件则是对通用于整个实验室的某些方面工作的文件化描述。 主要包括实验室文件和档案等的管理、内审、管理评审、人员培训、投诉处理、保密、计算机管理、新项