acsdkp及gabab受体调控脑胶质瘤细胞增殖的信号机制分析 word格式.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或 集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在 文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名： 日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。 本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日摘要Acetyl-N-Ser-Asp-Lys-Pro (AcSDKP) 是由脯氨酰寡肽酶 (POP) 特异性地水解 人体胸腺素 β4 氨基端而产生的天然产物。AcSDKP 不仅可以抑制造血干细胞的增殖， 并且可以促进新血管的生成。我们的前期研究发现在白血病及实体瘤等患者体内内 源性的 AcSDKP 均高度表达。相比于正常的小鼠，AcSDKP 在患急性髓细胞样白血 病小鼠的血浆和骨髓干细胞中的浓度高出 5 到 10 倍。同样，各种实体瘤（甲状腺、 乳腺、结肠、脑部和颈椎、肾脏、肺部、皮肤、卵巢以及前列腺癌等）患者血液中 AcSDKP 的浓度显著高于健康个体。此外，也有一部分研究表明 AcSDKP 对癌症的 发病机理没有帮助。到目前为止，AcSDKP 在肿瘤发生中的作用机制并不清晰，其 诱导的下游信号通路也研究甚少。我们的研究结果显示，外源 AcSDKP 对恶性肿瘤 细胞增殖的影响并不明显。在 AcSDKP 含量比较高的恶性胶质瘤细胞 U87-MG 中， 用来抑制细胞中内源 AcSDKP 的生成的 POPi（POP 的特异性抑制剂，S17092）的浓 度和抑制细胞增殖的 POPi 浓度并不是呈相关的。更有趣的是，高浓度 POPi 引起的 U87-MG 增殖水平的降低可以被外源加入的 AcSKDP 所恢复，而这种效应与 PI3K/Akt 通路的激活相关。但是 POPi 和 AcSDKP 的共处理并不能改变 ERK 的磷酸化水平。 AcSDKP 诱导的 PI3K 的两个催化亚基 p110α 和 p110β 对 U87-MG 细胞增殖调节的作 用是不同的：用 siRNA 片段干扰掉 p110α 的表达可以阻止 Akt 磷酸化水平的恢复， 而 p110β RNA 水平表达的下调没有该效应。我们的发现首次证明了 AcSDKP 在 PI3K/Akt 这条信号通路上对细胞增殖的调节具有很重要的作用。GABAB 受体作为 G 蛋白偶联受体 C 家族成员之一，已有报道暗示它在肿瘤的生 长和侵袭中发挥着一定的功能，但其分子机制目前尚不明确。我们的前期研究结果 显示 GABAB 受体被激活后能通过转激活 IGF-1R 保护细胞免受凋亡。除此之外，我 们还发现单独的 GB1asa 能通过转激活 IGFR 诱导 ERK 的磷酸化，这也是首次发现 单独的 GB1 能上膜行使独立的功能，暗示着 GB1 亚基在 GABAB 受体功能发挥中扮 演着重要的角色。在本课题中我们首先利用实时荧光定量 PCR 技术检测了 GABABI受体在不同细胞系中的表达情况，发现它在肿瘤细胞中的分布是多样化的，而且 GB1的 mRNA 表达水平远高于 GB2。进一步发现 GABAB 受体特异性的激动剂 Baclofen 和阳性变构剂 CGP7930 能够明显地抑制脑胶质瘤细胞 U87-MG 的增殖。GABAB 受 体被激活后还能影响 AKT、ERK、FAK 和 PKD 等蛋白的磷酸化。除此之外，我们 还第一次发现了激活 GABAB 受体能使 lncRNA MALAT1 的转录水平上调，MALAT1 已被报道与许多肿瘤的发生相关，这暗示着 MALAT1 有可能成为 GABAB 受体下游 的一个新的抑癌调控靶点。关键词：AcSDKP，脑胶质瘤，脯氨酰寡肽酶，AKT，GABAB 受体，增殖，信号通 路AbstactThe natural tetrapeptide acetyl-N-Ser-Asp-Lys-Pro (AcSDKP) is generated from the N-terminus of thymosin-β4 through enzymatic cleavage by prolyl oligopeptidase (POP). AcSDKP regulation of proliferation of different