abcg2在鼻咽癌中表达及其在鼻咽癌化疗中作用 word格式.docx

第四部分ABCG2 沉默对鼻咽癌细胞系 CNE-2 耐药的影响 摘要目的：观察沉默 ABCG2 基因的表达后，CNE-2 细胞对 Mitoxantrone 敏感性的变 化，探讨 ABCG2 在鼻咽癌细胞系 CNE-2 耐药中的作用机制。方法：建立转染 pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2 真核质粒和转染 control 质粒 的稳定单克隆细胞，用不同浓度的 Mitoxantrone（0,10 nM ,20 nM ,40 nM , 60 nM ,80 nM）处理 CNE-2，CNE-2/ siRNA-ABCG2 和 CNE-2/control 细胞 24h,48h 和 72h ，用 MTT 实验分析三个时间点，每种细胞的 IC50；并用 35.3 nMMitoxantron（e24h 时 CNE-2 细胞 IC50 的浓度）处理 CNE-2，CNE-2/ siRNA-ABCG2和 CNE-2/control 细胞 24h，用 CCK-8 和流式细胞检测分析各种细胞的增殖情况和细胞周期的变化。结果：在 24h,48h 和 72h 三个时间点，CNE-2/ siRNA-ABCG2 细胞的 IC50s 均比 CNE-2 细胞要低(t=11.9137, P=0.0003)；用 35.3 nM Mitoxantrone（24h 时 CNE-2 细胞 IC50 的浓度）作用 CNE-2，CNE-2/ siRNA-ABCG2 和 CNE-2/control 细胞， 每天用 CCK-8 检测细胞生长情况，连续检测十天，绘制生长曲线，发现 CNE-2/ siRNA-ABCG2 细胞的增殖与 CNE-2 细胞相比，明显减慢(t=2.2614,P=0.036)；35.3 nM Mitoxantrone 处理之后， CNE-2 细胞中凋亡细胞的比例从 8.70% 增加到 20.91%, G1 期细胞的比例从 37.22% 增加到 40.43%, G2/M 期细胞比例从33.76%下降 到 17.54% ，CNE-2/ siRNA-ABCG2 细胞中凋亡细胞的比例由8.32% 增加到 29.73%, G1 期细胞的比例由 39.94% 增加到 41.15%, G2/M 期细 胞比例由 30.47%下降 到 6.7%。结论：转染 pGC-silencer-U6/Neo/GFP/ABCG2 真核质粒的 CNE-2/ siRNA-ABCG2细胞对 Mitoxantrone 的敏感性增加。 关键词：ABCG2, 盐酸米托蒽醌，转染，CNE-2 细胞第五部分在裸鼠移植瘤模型中 ABCG2 沉默对 鼻咽癌细胞系 CNE-2 耐药的影响摘要目的：探讨 ABCG2 在 Mitoxantrone 处理鼻咽癌裸鼠移植瘤过程中的作用 方法：建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，用 10nM Mitoxantrone 分别在 CNE-2，CNE-2/ siRNA-ABCG2 以及 CNE-2/control 细胞形成的移植瘤的体部和基底部多点微量 注射，注射等体积的 PBS 作为对照组，记录肿瘤体积的增长曲线，并在 4 周后 处死裸鼠，取出移植瘤，用 TUNEL 检测肿瘤的细胞原位凋亡率。结果：60 只裸鼠无一死亡，体重均匀增加，成瘤率 100%。在 CNE-2 组，CNE-2/ siRNA-ABCG2 组和 CNE-2/control 组中，注射 Mitoxantrone 组的肿瘤体积的增长 均比相应的注射 PBS 组要慢； CNE-2 组和 CNE-2/control 组之间，注射 Mitoxantrone组和注射PBS组的肿瘤体积的增长均无明显差异 (t=0.9678,P=0.3460) ；在 CNE-2 组，CNE-2/ siRNA-ABCG2 组和 CNE-2/control 组中，三组注射 PBS 的裸鼠肿瘤体积增长均无明显差异（P0.05）；在 CNE-2 组 和 CNE-2/ siRNA-ABCG2 组中，用 Mitoxantrone 处理后，CNE-2/ siRNA-ABCG2 组肿瘤体积增长明显比 CNE-2 组要慢(t=2.6255,P=0.0172)。对取出的移植瘤进行 原位 TUNEL 检测，发现各组的凋亡率各不相同。在 CNE-2/ siRNA-ABCG2 组， 凋亡率为 29.45 ± 5.29% ，在 CNE-2 组，凋亡率为 18.51 ± 4.33% ，而在 CNE-2/control 组的凋亡率为 12.13 ± 6.04% 。在 CNE-2 组，CNE-2/ siRNA-ABCG2 组和 CNE-2/control 组三组中，用 PBS 处理的肿瘤凋亡无明显差异。 结论：抑