aids患者感染真菌特点及耐药基因erg11基因的分析 word格式.docxVIP

中英文缩略词对照表英文缩写英文全名中文译名AIDSacquired immunodeficiency syndrome获得性免疫缺陷综合症PCRPolymerase Chain Reaction聚合酶链反应ITSIntertranscribed spacer转录间隔区NTSNon transcribed spacer非转录间隔区PCRPolymerase Chain Reaction聚合酶链反应GGlucose葡萄糖ddH2ODouble distilled water双蒸水dNTPdATP dCTP dGTP dTTP三磷酸脱氧核苷酸EBEthidium Bromide溴化乙锭EDTAEthylendiaminetetra-acetic Acid乙二胺四乙酸TAETris-base Acid elosution电泳缓冲液bpbase pair碱基对Bbiotin生物素Hhistidine组氨酸MMethnol甲醇GYglycerol甘油SDSSodium dodecylsulfate十二烷基磺酸钠DTTDL-Dithiothreitol二硫苏糖醇LBLuria-Bertani溶菌肉汤YPDYeast Extract Peptone DextroseMedium酵母浸出粉胨葡萄糖培养基MICminimal inhibitory concentration最小抑菌浓度目录摘要 1Abstract2前言 3材料与方法 51． 材料 51.1 标本收集 51.2 主要试剂来源 51.3 主要的实验仪器设备 71.4 实验溶液、电泳凝胶及培养基的配制 82． 方法 152.1 真菌镜检 152.2 菌种提纯 152.3 菌种形态学鉴定 162.4 体外药敏实验 162.5 DNA 的提取172.6 分子生物学菌种鉴定 182.7 对白色念珠菌的 ERG11 基因进行 PCR 扩增192.8 对突变位点 E266D 和 V488I 行基因克隆202.9 初代电转化菌株药敏实验（空载体和未转化 GS115 作对照）262.10 诱导后电转化药敏实验（空载体和未转化 GS115 作对照）26结果 28讨论 34小结 43致谢 44参考文献 45综述 50攻读硕士学位期间发表的学位论文 56AIDS 患者感染真菌特点及耐药基因 ERG11基因的研究研究生：王 丽导师：惠 艳教授摘要目的：探讨分离自艾滋病（AIDS）患者感染真菌的特点及唑类抗真菌药物的作 用靶位基因 Erg11 基因突变与耐药的关系，初步了解 AIDS 患者感染真菌及 Erg11 基 因突变的特点。方法：对分离的菌株进行菌种鉴定及药敏实验，并采用聚合酶链反 应（PCR）对分离的白念珠菌的 Erg11 基因扩增、测序，用 DNAman 软件将测序结 果与 GeneBank 中的 X13296 进行比对，将突变碱基翻译成氨基酸，确定是否发生错 义突变。并对有意义突变位点行体外异体表达。结果：艾滋病患者常见致病菌为白 念珠菌，其对唑类抗真菌药物的耐药率较高。共检出 40 个碱基突变位点，包括 27 个同义突变位点和 13 个错义突变位点。E266D 和 V488I 与白念珠菌对唑类抗真菌药 物耐药无关。耐一种药物的突变菌株中每株菌只发生一处错义突变或无错义突变， 而耐二种或三种药物的菌株中每株菌还可以同时出现两处或三处错义突变。结论： 艾滋病患者常见致病菌为白念珠菌；其对唑类抗真菌药物的耐药率较高；白念珠菌 对唑类抗真菌药物的耐药机制是多种机制协调作用的结果：ERG11 基因错义突变位 点、错义突变位点的协同作用、错义突变基因由杂合子向纯合子的转化、药物外排 增强、生物膜的形成均可能与白念珠菌耐药有关。关键词：艾滋病；白念珠菌；Erg11 基因；耐药机制1Investigation of fungal infections and resistance gene ERG11 of AIDS patientsPostgarduate student: Wang LiSupervisor: Hui Yan professorAbstractObjective: In order to understanding the fungal infections and Erg11 gene mutation from AIDS patients, In this paper, the characteristics of fungal infection and the relationship between the target gene Erg11 and azole antifungal agents isolated f