甾体激素类药物的分析精品.ppt

一、高效液相色谱法 各国药典采用反相高效液相法测定，方法一般为内标法。填充剂为十八烷基硅烷化键合硅胶；流动相多为甲醇-水、乙腈-水-异丙醇、甲醇-四氢呋喃-水等混合溶剂；检测器均为紫外光检测器，检测波长为240nm或254nm。 为了提高分离效率、获得满意的峰形，有时在流动相中加入醋酸缓冲液或磷酸缓冲液调节流动相的pH值。 二、紫外分光光度法 本类药物分子结构中有共轭体系△4-3-酮、△1，4-3-酮、苯环、酚羟基等结构。 如皮质激素、雄性激素、孕激素及口服避孕药中有分子中α、β不饱和酮结构，在紫外光区240nm附近有最大吸收；具有苯酚结构的雌激素在280nm附近有最大吸收，均可用紫外分光光度法测定含量。 1、方法原理 甾体激素C3上酮基及某些其它位置上的酮基都能在酸性条件下与羰基试剂如异烟肼、2，4-二硝基苯肼及氨基脲等起缩合反应，可作为含量测定的依据。异烟肼是目前广泛采用的一种，异烟肼（INH）试剂可与一些甾酮在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长处具有最大吸收。 （一）异烟肼比色法 三、比色法 某些具有△4-3-酮和C20－酮基的甾体激素可形成双腙，如黄体酮、可的松、氢化可的松等。 （二）测定方法 分别制备供试品、对照品溶液，再分别与异烟肼溶液反应，在420nm波长处分别测定吸收度并计算结果。 反应原理 皮质激素C17-α-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有色甲鐕。生成的颜色随所用试剂和条件的不同而定，多为蓝色或红色。 （二）四氮唑比色法 （一）方法原理 雌激素的含量测定，曾经广泛应用Kober反应。该法是雌激素在硫酸的作用下，通过质子化、分子重排、脱氢等作用形成共轭多烯而显色。 （三）Kober反应比色法 反应分为以下两步: ①被硫酸氧化而形成黄色产物； ②加水或稀硫酸稀释后继续氧化最终形成红色产物。 （二）测定方法：炔雌醇片 本类药物的药代学研究、生物利用度研究及违禁药物监测等均需测定生物样品中的甾体激素药物。生物样品中本类药物的分析要求方法的专属性强、灵敏度高，因本类药物的给药剂量小，血药浓度很低（ng级或更低）。体内有内源性的甾体激素，故测定方法多采用GC、HPLC法测定，特别是采用GC-MS、HPLC-MS法。使用MS作为检测器，分析方法的专属性和灵敏度更高。 采用GC-MS法对诺龙等19种蛋白同化激素的人体代谢进行了研究。 课本P261有蛋白同化激素(GC-MS )及孕激素（HPLC）的测定举例。 四、生物样品中甾体激素的分析 几种测定方法的特点及其应用 方法名称 测定基团 主要试剂 甾体类别 高效液相色谱法 Δ4-3=O 或芳香A环 C18柱 甲醇（乙腈）－水 各类甾体激素 紫外分光光度法 Δ4-3=O 或Δ1，4-3＝O A环为芳香环 溶剂（无水乙醇、乙醇、甲醇） 肾上腺皮质激素 雄性激素 雌性激素 口服避孕药 四氮唑比色法 C17－α－醇酮基 三苯四氮唑盐 四氮唑盐 氢氧化四甲基铵 肾上腺皮质激素 异烟肼比色法 Δ4-3=O 或Δ1，4-3＝O 异烟肼 盐酸 肾上腺皮质激素、 雄性激素、孕酮 Kober比色法 C3 －酚OH A环为芳香环 硫酸、硫酸亚铁铵、过氧化氢、苯酚 雌性激素 本 章 小 结 1、掌握甾体激素类药物的分类及结构特征。 2、掌握C17-α-醇酮基反应、酮基的呈色反应。 3、掌握四氮唑盐比色法的原理。 4、掌握几种含量测定方法的特定及其应用。 第十章 甾体激素类药物的分析 概 述 激素（Hormone，荷尔蒙）----是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。 如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。 甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核，基本骨架为： 第一节 基本结构和分类 常用的有氢化可的松、醋酸可的松、醋酸泼尼松等。 一、肾上腺皮质激素 结构特点： ① A环3位为羰基、4，5位间为双键，形成共轭体系，标记为：Δ4-3-酮基（又称α、β不饱和酮结构），或写成: Δ4-C3=O； ② C环11位上有羰基或羟基； ③ D环17位上有α- 醇酮基侧链 （ ），并且多数还具α-羟基。 二、雄性激素及蛋白同化激素 （1）临床常用的雄性激素为睾丸素（睾酮）的衍生物，如丙酸睾丸素、苯乙酸睾丸素。 （2）常用的蛋白固化激素有苯丙酸诺龙（苯丙酸去甲睾酮）、康力龙、康复龙等。 （1）结构特征（两种激素之共同点）： ① A环3位Δ