真菌诊治进展精品.ppt

预处理： *EDTA作预处理，分解免疫复合物，沉淀蛋白 *加热使免疫复合物失活。 界值确定： *阳性0.5;阴性0.5;欧美已普遍接受（06年）。 *将界值由1.5改为0.5，敏感性由76.3%提高到97.4%，特异度由97.5%降至90.5%。 结果判读： *两次阳性可确诊感染。 *重复检测阴性可排除真菌感染。 Johan A et al , Clinical Infectious Diseases 2007; 44:1329–36 GM试验注意事项 Platelia Aspergillus EIA – 结果判断 GM不同Cutoffs值的敏感性和特异性 Marr KA et al, J Infect Dis 2004;190:641-9 *蘸有曲霉孢子的棉花、棉签 *患者样本中儿童比例高(83%)：双歧杆菌的脂膜酸可与EB-A2抗体结合 *破损的肠粘膜：不洁饮食携带的GM *肠外使用β-内酰胺类抗生素：派拉西林、阿莫西林 Alban Aubry,et al, J CM 2006p. 389–394 *细胞毒性药物：e.g.:环磷酰胺 *移植物抗宿主病：存在与抗体结合的其它蛋白 Hamaki et al, Bone Marrow Transplant. 2001 Sep;28(6):633-4 假阳性: Vale′ rio R et al, Mycopathologia (2007) 163:191–202 其它GM可能出现阳性的真菌 *抗体多 Raoul Herbrecht et al, Journal of Clinical Oncology, Vol 20, No 7 (April 1), 2002 *抗真菌药：两性霉素B、泊沙康唑、伊曲康唑 通过抑制菌丝生长从而减少GM的分泌。 *感染部位：GM检测的敏感度在局限性感染 比侵袭性感染低：慢性肉芽肿。 *侵血管性弱：菌丝少时 *菌量少 假阴性： （1）GM检测不仅利于疾病的确诊，也有助于指导用药。 *用药后监测GM可评估药效及预后。 *频率：2次/周。 *适用对象:粒细胞减少、移植、长期用激素的患者 （2）结合G试验可减少假阳性。 （3）结合临床表现及其它辅助检查确诊。 应 用 GM 抗原 GM抗原ELISA检测应用（Platelia试剂盒） 48例患者：确诊IA4例，3例阳性；高度怀疑IA13例，8例阳性；可疑IA31例，2例阳性。 王，等。临床皮肤科杂志，2006。 灵敏性为64.7% 特异性为93.5% 假阳性率为6.5% 假阴性率为35.3% 曲霉 GM 抗原系列监测 n = 362 高危粒细胞缺乏病人 Sandwich ELISA ≥ 2 times weekly, 11.7% 阳性 n = 30 proven IA n = 9 probable IA n = 264 with no IA 敏感性 89.7% 特异性 98.1% 阳性预测值PPV 87.5% 阴性预测值NPV 98.4% Maertens J et al, Blood 2001;97:1604-10 曲霉感染检测的影响因素 半乳甘露聚糖在血中存在时间短，建议： —高危人群每周至少检测2次，动态观察 —结合影象学、培养结果综合分析诊断 假阴性 假阳性 哌拉西林/他唑巴坦 与其它细菌或真菌成分有交叉反应 肠道中定植的曲霉释放GM进入血液循环 含有谷物的食物中存在GM抗原，通过受损肠黏膜进入血循环导致抗原血症，化疗后出现严重黏膜炎的更易发生 检测真菌DNA的PCR试验 标本： 全血 血清 活检组织 BAL CSF 不同方法： ? DNA 提取 ? PCR 设计 ? 产物检测 PCR PCR技术用于诊断 种特异-PCR 非特异 PCR ?杂交 Standart single nested PCR-EIA Real-time 标本 全血 血浆 血清 BAL 最低检测范围 4-10 cfu/ml 25-100 fg DNA 原位杂交 目的基因 多拷贝基因 PCR 检测和鉴定 多引物 多样本制备 高敏感度: 1 - 100 cells/ml pan-fungal PCR 敏感度： 100% (多个标本) 与治疗一致 J Clin Microbiol 1997;35:1353-60 SPEED PCR过筛试验诊断IA 每周监测2次—通用引物; 确定采用巢式和实时定量; 敏感性100%,特异性65%; 早于临床症状2天,早于确诊9天; 动态观察持续阴性可排除; Dr.Maschmeyer G. in 2nd Trends in Medical My