真核生物基因组DNA的提取、电泳推荐.pptVIP

* * * * * * * 置50°C水浴50分钟讲解： 能溶解入10％一l5％的水分，因溶解的水分而损失部分DNA (酚不能抑制RNAase的活性, 溶解掉部分ploy(A)RNA) * * * * * * 要。 * * 本次实验使用未经酶切的DNA样品电泳，由于片段大，在加样孔附近可看到一条很亮的DNA带。 分子生物学实验 1、 欢迎大家参加分生实验的学习！ 2、 分生实验的重要性； 3、 每组2人，做一份实验； 4、 守纪律，听老师安排，穿白衣； 5、 同学们在听课时要作好记录; 6、 上课时间、课间休息。 考试形式 实验成绩考核占总成绩40%，满分为40分。缺实验课成绩者，本课程不予通过。 随堂考试（10分）(主要考察理论课与实验课结合内容 ) 闭卷考试（15分)(实验方法及原理、实验结果及注意事项、仪器设备操作及注意事项和对失败结果的原因的分析 ) 实验设计（15分）(实验名称、实验目的、方法和步骤预期实验结果、关键问题讨论及参考文献) * 实验课安排 实验一 基因组DNA的提取 实验二 PCR及琼脂糖凝胶电泳检测 实验三 PCR产物的限制性酶切片段分析 实验四 总RNA的提取及逆转录 实验五 PCR产物的TA连接 实验六 转化 实验七 质粒的提取、酶切鉴定 实验八 讨论及实验课考试 * 实验课安排 1. 提取基因组DNA 重组质粒 6.连接产物转化 无质粒的E.Coli 死亡 有质粒的E.Coli 存活 2. PCR获取目的基因 7. 重组质粒提取及酶切鉴定 质粒 5. TA 连接 4. RNA提取与逆转录 T载体 平板筛选 * ?一、加样器的使用及注意事项 1、 用途 2、 使用 2.1 根据取样量，选择合适的加样器。 5ul、50ul、500ul，应选择哪个加样器? 顶部标有加样器的最大量程， 分别为： 20ul: 0.5 ~ 20 ?l 100/200ul: 20 ~ 100/200 ?l 1000ul: 200ul ~ 1000 ?l 实验仪器的使用及注意事项 * 练习：加样器读数为 100，实际体积各为多少? 2.2 如何调节？ (1)首先观察目前读数,假设为050: 1000 ?l: 500 ?l 100 ?l: 50 ?l 20 ?l： 5 ?l (2)顺时针调节--- 读数变小 逆时针调节--- 读数变大 (3)注意：调节前加样器读数正处于最大量程或最小量程时，如果向错误方向调节，马上会超出量程，将会损害加样器的精度。 * 2.3 加样器使用步骤(示教及学生练习)： 6）(吸头内有液体时，不能将加样器倒置或平放，以防液体倒流损坏加样器！) 贴容器内壁，将液体匀速打出，加样器推到第二挡。观察吸头内液体是否完全打出并立即弃于废物盒内. 5）抬起加样器,估计体积是否正确,将外壁液体用容器口引流回去 4）缓慢松开拇指,吸取液体。松开过快，液体上冲会腐蚀加样器;完全放开拇指后，停留约半秒钟, 急于离开液面，容易吸入空气。 3）将吸头插入液面下适当深度，过深可能会腐蚀加样器, 过浅可能会吸入空气。 2）吸取液体前，先打到第一挡。 1）选择加样器,观察读数,调节读数，吸头的安装要紧密。不要用手直接拿吸头，安上吸头后一定要再固定一下 * 1、打开电源 2、离心管中的液体为2/3,盖紧盖子,防止离心机被腐蚀。 二、离心机的使用注意事项 1代表转速盘上方的数据，2代表下方的数据。 3、样品配平, 对称放入离心机(管的连接处朝外). 4、设定离心时间(如设定2分钟，可定时多点时间，再用手表记时)。 5、统一离心，逐渐升到要求转速。 * 实验一、真核生物基因组DNA的提取和电泳 * 一、 实验背景 高等生物的基因组相当宠大。 真核细胞基因组约含１万个结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对真核细胞基因组的结构，组成，以及表达调控的研究是至关重要的 研究的起点就是要获得纯度高－不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染；得率好－以便有足够量用于分析；基因组相对完整－不断裂的基因组以便用于以后PCR分析，RFLP分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。 * 掌握小鼠肝脏组织模板DNA的提取技术。 学习DNA琼脂糖凝胶电泳的原理和技术。 第一部分 ：肝组织制备、蛋白酶k消化 第二部分: 酚氯仿抽提、乙醇沉淀 第三部分： DNA琼脂糖凝胶电泳 三、实验材料 小鼠肝脏组织 四、主