高二生物(基因工程的基本操作程序3.pptVIP

一、目的基因的获取 1、目的基因概念： 主要指的是编码蛋白质的结构基因。也可以是一些具有调控作用的因子。 2、目的基因获取方法： 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 通过DNA合成仪直接合成目的基因 从基因文库中获取目的基因 从基因文库中获取目的基因 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 PCR的全称： 多聚酶链式反应 PCR的原理： DNA复制 PCR技术扩增目的基因的前提条件： 要有一段已知的目的基因的核苷酸序列。 利用PCR技术扩增目的基因 三、目的基因导入受体细胞 1、什么是转化？ 2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 三、目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 3、利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 * 目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序的步骤： 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 1、什么是目的基因？ 2、获取目的基因的方法有哪些？ （1）从基因库中获取目的基因 ①基因组文库和部分基因文库的慨念 ③基因组文库和cDNA文库的主要区别 ②基因组文库和cDNA文库的构建 （一）从基因文库中获取目的基因 1. 基因组文库 将含有某种生物不同基因的许多片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。 受体菌包含了某种生物所有的基因，该受体菌群体称为这种生物的基因组文库。 2. 部分基因文库 受体菌包含了一种生物部分基因，该受体菌群体称为这种生物的部分基因文库，如cDNA文库。 基因组文库构建 限制酶 供体细胞的 全部DNA 大量DNA 片段 拼接到载体上 导入受体细胞扩增 cDNA文库的构建--mRNA反转录形成 mRNA 逆转录酶 杂交双链 核酸酶H 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA 与载体连接 导入受体菌群 该生物 cDNA文库 基因组文库和cDNA文库的主要区别 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子（具有启动作用的DNA片段） 基因中内含子(位于编码蛋白质序列的非编码DNA片段） 基因多少 物种间的基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 PCR的条件： PCR的过程： PCR的过程： 利用PCR技术扩增目的基因 变性(90-95℃) 复性(55-60℃) 延伸(70-75℃) 模板 原料 引物 　酶 控制温度 ——目的基因DNA ——四种脱氧核苷酸 ——耐热的DNA聚合酶 ——PCR仪自动调控 PCR的条件： 利用PCR技术扩增目的基因过程  条件： 基因较小，核苷酸序列已知。 通过DNA合成仪直接合成目的基因 二、基因表达载体的构建—核心 1、基因表达载体的组成？ 2、各组成成分的作用？ 3、基因表达载体的构建目的？ 转化 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 1.目的基因导入植物细胞 常用的方法: 农杆菌转化法、基因枪法、花粉 管通道法 农杆菌的特点: a.易感染双子叶植物和祼子植物。 b.具有趋化性。 c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上 1.目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法的导入过程: 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 脱分化 农杆菌 导入植物细胞通过组织培养产生新个体 再分化 移植 个体生物学水平的鉴定 如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达 导入植物细胞 组织培养 ①细胞类型： ②操作程序： 方法----显微注射法 2.将目的基因导入动物细胞 发育成新性状动物 移植到子宫或输卵管 培养成早期胚胎 显微注射 取受精卵 提纯含目的基因表达载体 受精卵 三、目的基因导入受体细胞 3.目的基因导入微生物细胞 原核生物的特点: 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。 大肠杆菌的转化过程: 用Ca2+处理细胞