免疫学实验设计及可行性分析.pptVIP

* mouse human note 天然免疫 * mouse human note 特异性免疫 * mouse human note 特异性免疫－临床免疫 * mouse human note 特异性免疫－临床免疫 * 例5； 外周血中性粒细胞在被动过敏性休克中的作用 去除中性粒细胞，观察： 1、休克的改善 2、中性粒细胞产物MPO、NO、PAF检测； 3、效应细胞表面FcR的变化； which one should be done first? * 三. 指标的确定与方法的选择 体液免疫 细胞免疫 细胞因子及趋化因子检测 细胞因子及趋化因子受体，包括可溶性受体 黏附分子检测 天然免疫 非特异性免疫功能检测 8. 其它： * [1] B细胞 :数量, 功能-增殖反应, 抗体形成细胞(PFC), 浆细胞, 定量溶血试验,ELISPOT等 [2] 免疫球蛋白水平: 骨髓瘤, 免疫缺陷, 自身免疫病等 [3] 抗体: 特异性抗体及其效价, 血型抗体, 针对某些变应原的抗体; 某些表位特异性抗体; 功能性抗体, 如中和性抗体及细胞毒性抗体等 [4] 淋巴组织活检或切片 [5] 与B细胞分化增值，抗体产生有关的细胞因子、黏附分子等 1. 体液免疫 指标的确定 * [1] 细胞数量，亚群(CTL，Th1,Th2,Treg，Th17,Th22,Th9, Tfh等）及分化抗原的表达 如活化细胞、记忆细胞等 [2] 细胞因子测定 [3] 细胞增殖或转化试验 : 丝裂原或特异性抗原 [4] 混合淋巴细胞培养: 单向及双向 [5]细胞毒试验: ADCC, CMC( CTL), LAC, NK 及TIL细胞 [6]与T细胞功能密切相关的细胞：树突状细胞，巨噬细胞等 [7]体内实验: 皮试 2. T细胞及其介导免疫 * [1] 生物活性测定: 细胞依赖株或自制依赖细胞(母细胞) 集落实验、杀伤实验 [2] 抗原性测定: ELISA试剂盒, 细胞内细胞因子的测定. [3] mRNA测定 细胞膜表面受体及可溶性受体 细胞膜表面及可溶性黏附分子 3. 细胞因子与趋化因子测定 4. 细胞因子与趋化因子受体检测 5. 粘附分子测定 * [1] 补体: 总补体及各成分 [2] 吞噬细胞: 巨噬细胞（TAM，MDSC），中性粒细胞等 [3] NK细胞，NKT，iNKT [4] DC细胞 [5] MBL [6] 模式识别受体：Toll 样受体(Toll like receptors,TLR )，NLR， [7] 溶菌酶,防御素等 ? 6. 非特异性免疫 7. 其它: 趋化因子及其受体测定 * PRR家族新成员 PPR成员 定位 识别配基及生物学活性 NLR (nucleotide-binding and oligomerization domain (NOD)-like receptors) 胞浆 细菌、病毒及寄生虫成份；内源性危险信号分子； 参与免疫调节，免疫治疗靶点（仅细菌产物为激动剂） RLR retinoic acid inducible gene-I (RIG)-like receptors (RLRs) 胞浆 病毒RNA CLR (C-type lectin receptor) 胞膜，细胞外 参与免疫调节 Galectins （半乳凝素） 胞浆，胞核，细胞外 识别细菌、病毒与寄生虫表面的糖苷结构；识别内源分子 * 7. 免疫相关信号转导分子的检测 * * * ◆ 特异性 ◆ 敏感性 ◆ 检测范围 ◆ 稳定性 ◆ 所需条件 ◆ 经费支持 方法的选择 等离子表面共振（SPR）检测单抗特异性 * 提示： ● 与其它系统指标的配合使用: 皮质酮、激素、神经介质、肝功、血糖, 肿瘤的消退等 ● 由于新理论和新技术的出现