猪瘟(csf)活疫苗耐热剂型的初步研究.pdf

猪瘟(CSF)活疫苗耐热剂型的初步研究 2．1泡沫干燥耐热保护剂配方初步筛选……………………………………………．30 2．2泡沫干燥耐热保护剂优化配方筛选……………………………………………．32 2．3猪瘟泡沫干燥疫苗工艺优化……………………………………………………．33 2．4疫苗不同保存期耐老化实验……………………………………………………．34 2．5保护剂对兔体的干扰性检测……………………………………………………．35 3结果………………………………………………………………………………………35 3．1泡沫干燥配方筛选结果…………………………………………………………．35 3．2泡沫干燥工艺优化结果…………………………………………………………．37 3-3猪瘟泡沫干燥耐老化结果………………………………………………………．39 3．4泡沫干燥疫苗理化性质…………………………………………………………．40 3．5保护剂对兔体的干扰性检测结果………………………………………………．4l 4讨论……………………………………………………………………………………………………………………42 参考文献…………………………………………………………………………………………45 全文总结…………………………………………………………………………………………．．53 致{射…………………………………………………………………………………………………………………………．．55 万方数据 摘要 猪瘟活疫苗耐热剂型的初步研究 摘要 猪瘟是由猪瘟病毒引起的急性、热性、高致病性和高死亡率疾病，是养猪业 防控的重大疾病之一；疫苗免疫是防控猪瘟的最有效手段。目前，国内外猪瘟活 疫苗生产大多采用冷冻干燥技术，通过添加冷冻干燥耐热保护剂可使猪瘟疫苗在 2～8。C条件下有效保存2年；但现有的耐热保护剂配方中含有的明胶和蛋白质比 例高，它们常常导致强烈的过敏、发热等免疫副反应，影响疫苗安全性和有效性。 另外，冷冻干燥疫苗仍然对环境温度的要求比较严格，在保存、运输及使用中均 需要依赖较高配置的“冷链”系统，给疫苗的存储、运输和使用带来极大的不便。 泡沫干燥技术制备的疫苗耐热性能往往更加优良，能够减低对“冷链”系统的依赖 性。本研究以改进猪瘟疫苗真空冷冻干燥技术和创新研发猪瘟疫苗泡沫干燥剂型 为目的，通配方的筛选、干燥工艺的优化和耐老化实验，研究适用于猪瘟活疫苗 真空冷冻干燥生产的无蛋白、无明胶冻干保护剂新配方及相应的干燥工艺，以期 解决由蛋白和明胶引起的疫苗安全性问题；探索猪瘟活疫苗泡沫干燥保护剂配方 并建立相应的泡沫干燥工艺，为室温保存猪瘟活疫苗研究奠定基础。 1猪瘟活疫苗真空冷冻干燥剂型的研究 冷冻干燥保护剂以蔗糖、乳糖、EDTA等为配方主要成分，通过单因素变量 试验，以配方形态、干燥疫苗形态、残余水份含量为指标，筛选冷冻干燥猪瘟活 疫苗耐热保护剂配方，并成功筛选出了无明胶、无蛋白配方D4和传统冻干保护 剂配方S3．T1，D4为首个猪瘟冷冻干燥耐热保护剂的无明胶、无蛋白配方，可 有效避免使用过程中因明胶、外源蛋白引起的附带免疫反应。在筛选出配方的基 础上，对冷冻干燥_Y--艺进行优化。针对冻干产品分层、萎缩等现象，通过对升华 阶段搁板温度的控制和一次干燥时间的调整，以冻干产品的物理形态、残余水份 和37℃10d耐老化为标准，最终以优4匕_r-艺对较理想的配方D4和S3．T1进行3 批次的重复，测定其病毒效价。S3．T1组疫苗37℃耐老化至16d，效价损失在 1．0滴度以内；D4组配苗37℃保存11d后病毒滴度损失小于0．7，均符合耐老化 要求。 2猪瘟活疫苗泡沫干燥剂型的研究 泡沫干燥保护剂以海藻糖、明胶为主要配方成分，通过单因素变量试验，以 配方形态、干燥疫苗形态、残余水份含量为指标，筛选出泡沫干燥猪瘟活疫苗的 耐热保护剂配方。从基础配方中挑选出T28C系列